mips的传代问题

zhangtcm

          一、mips传代过程中有没有必要去除MEF？我们从许多文献中看到了这么个词，差速贴壁，即依靠细胞不同的贴壁速率，去除某些细胞，如MEF细胞一般会在45min到1小时内贴壁，即可去除MEF。但我们认为即使传代操作，下一代还是需要MEF的，那么传至下一代，即使让老的MEF贴到下一代的培养瓶中，总不至于老的MEF贴上去，把新的MEF挤走了吧，所以不特意去除，又有何妨？9 n9 H5 _& O& _1 K% ]

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4 Q( _6 d& E  z0 K$ w# A0 h        二、 今天又在丁香园上看到这么一段话："饲养层细胞是ＭＭＣ处理过的，已经丧失了增殖分裂能力，传代时可以不管．传代后次日换液，就可以把未贴壁的细胞（大部分是饲养细胞，还有一些已经分化的ＥＳ细胞）去掉"，如果饲养层细胞是不会贴壁的，那差速贴壁去除饲养层细胞，更不是成了一个笑话。. t/ Z! x( i5 n1 ]) B+ u' m
本人现在决定，培养一段时间MEF（不加mips），再消化后，使用差速贴壁法，看看细胞究竟是能不能在1小时内贴壁。或者在第二天换液时仍然未贴壁。6 Y; K: F3 t1 ?" e+ `* v

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      三、传代操作时最头疼的是怎样去除分化的细胞问题，在无饲养层细胞的情况下，依靠分化的细胞要比未分化的细胞贴的快，是不是能用差速贴壁的去除一部分分化的细胞，那么这个时间又怎么定?  我们尝试了1个小时的差速贴壁，去除未贴壁的细胞后，把贴壁的细胞再吹找起来，再送入有饲养层细胞的培养瓶中，这些细胞并未能长成成纤维细胞状。仍是圆形的。9 j9 f6 W% C8 |! r! k4 s. p

% Q. ]" c$ v4 T6 `8 i. @  ~上述三点是个人愚见，请各位指教。( o% ~5 }2 o/ R8 g

zhangtcm

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* d5 ]) u# u" B9 P0 ~3 o1 U, w非常感谢你的解惑