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一、mips传代过程中有没有必要去除MEF?我们从许多文献中看到了这么个词,差速贴壁,即依靠细胞不同的贴壁速率,去除某些细胞,如MEF细胞一般会在45min到1小时内贴壁,即可去除MEF。但我们认为即使传代操作,下一代还是需要MEF的,那么传至下一代,即使让老的MEF贴到下一代的培养瓶中,总不至于老的MEF贴上去,把新的MEF挤走了吧,所以不特意去除,又有何妨?
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二、 今天又在丁香园上看到这么一段话:"饲养层细胞是MMC处理过的,已经丧失了增殖分裂能力,传代时可以不管.传代后次日换液,就可以把未贴壁的细胞(大部分是饲养细胞,还有一些已经分化的ES细胞)去掉",如果饲养层细胞是不会贴壁的,那差速贴壁去除饲养层细胞,更不是成了一个笑话。; n5 z; ^! f/ q) b7 o
本人现在决定,培养一段时间MEF(不加mips),再消化后,使用差速贴壁法,看看细胞究竟是能不能在1小时内贴壁。或者在第二天换液时仍然未贴壁。1 `$ O0 D! u9 r6 d' z/ }
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三、传代操作时最头疼的是怎样去除分化的细胞问题,在无饲养层细胞的情况下,依靠分化的细胞要比未分化的细胞贴的快,是不是能用差速贴壁的去除一部分分化的细胞,那么这个时间又怎么定? 我们尝试了1个小时的差速贴壁,去除未贴壁的细胞后,把贴壁的细胞再吹找起来,再送入有饲养层细胞的培养瓶中,这些细胞并未能长成成纤维细胞状。仍是圆形的。6 ^( [2 M |8 t/ \7 ^' a+ K
6 D6 P& R( j9 J$ @& h0 n上述三点是个人愚见,请各位指教。
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