关于CIK试验中的一些问题，麻烦大家来解答一下，谢谢

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我这几天做实验，有几处不明白的地方，望高手解答，谢谢！
, l# [+ e( x- O3 o. K  _$ @* h1.第0天加混有1000U/ml的IFN-r 1640培养基后，等24h以后，是把细胞离心后再加入含CD3和IL-2的完全培养基，还是直接在含有IFN-r的培养基中加入CD3和IL-2？？？$ D* k$ d7 r# O! J+ n
2.隔2-3天换液的时候，是要把细胞离心后再换只含有IL-2的完全培养基？？？还是直接在含有CD3和IL-2的培养基中添加IL-2的培养基？？？

DannyXia

不需要离心，对细胞生长会有影响。
( S8 k/ M5 A6 x7 S. k另外第0天是加IFN-γ，直接加入细胞中，第1天CD3和IL-2也是直接加入细胞中。  

weijunning

回复 lyj-0017 的帖子
6 P: z; ?$ A. i, O  d# f
0 j7 D" j2 X5 g& ?$ F8 S: {% O一开始是在175培养瓶中培养，分离第二天补液30ml/瓶，之后就不要再补液了，因为期间细胞增殖不是很快。第5天左右瓶中的细胞一般会长起来，这时收集计数，按1.0~5.0X105密度铺培养袋。" O9 c: f9 }! b9 M9 @9 s/ n3 i

xld1984

不要离心，直接加。

lyj-0017

回复 weijunning 的帖子
6 O2 h# P& o% P. W  |8 i! x& ?7 {8 Q9 h
在培养袋中培养时，两天的时间细胞应该不会增殖那么快吧？这时加液的话，细胞密度应该会降低吧？加液后，形成的细胞集落会不会大片聚集呢？

lyj-0017

回复 realff 的帖子4 T% J1 M  r+ \2 m2 P

8 O# O/ y$ D; g2 b* y前5天都不用怎么补液？请问你们是用的瓶子还是袋子培养的呢？

weijunning

一般是直接将新的因子加入原来的培养体系。置于多久补一次液，每次补多少，这需要经验摸索。一般是培养第1天补液，30ml/瓶，是175的大瓶，之后就不要管了，直到细胞密度合适，细胞数达到8.0X107左右（外周血），1X109(单采），就按2~5X105的密度转袋培养；在培养袋中一般是隔两天补一次液，补液量根据细胞数，保持生长密度1x106.在回输前再补一次液即可。不建议中间频繁给细胞补液换液，增加污染几率。

硕果累累_555

不要离心，否则会损失细胞。直接扩大体积即可。

wwxx66

没有必要离心，离心对细胞会有伤害。一般都是直接加的，一些国外的文献做的比较的细致，往往离心后再加入CD3和IL-2。这都是做科研，在大规模生产中不适用，不实用！

realff

不用离心，直接加液。一般前5天不用怎么补液吧。补液除了看颜色，我认为还是要计数啊，因为光靠经验怎么做到标准化？自己多计数多累经验，掌握一种培养基最高的培养密度，每次传代前计数结果作为是否要补液、补加多少的依据。