饲养层加fgf后，细胞形状变长，变细，培养液很脏

yuhaoze

诱导ips的时候用的饲养层，确定了没有支原体污染，用MMC处理之后，不加fgf的时候细胞挺好的，加了fgf细胞形状就变得细长，而且很多细胞碎片，这样正常吗？会影响ips诱导吗？

king8

问题不大，我也经常会碰到这样的现象

yuhaoze

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( B6 |  {' y0 a% K' \. K8 }0 h
谢谢！

yuhaoze

回复 king8 的帖子0 H: v: ^* o1 K# a; L8 x
! c# `9 q7 d# `) r" t
那诱导的时候，是将病毒感染后的细胞接种到MEF之后，第二天换带有fgf的ES培养液吗？还是过几天再换？

Jonathan

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" c2 O0 l2 t# S, i
7 y' W) D8 d1 tMEF变细长是因为你换了KSR media的原因，不是因为其中带了bfgf。一般是接种到MEF之后，隔1-2天换成KSR media，也就是普通的human ES standard media。你也可以试试用coat 了matrigel的6-well plate试一试，不用feeder，这个方法我试过N次，屡试不爽，很好用。

yuhaoze

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' J. M. \, F3 d5 D- `0 o) U
- A: Z, q! V& w: T& v9 N! C' _+ L我有matrigel，你说的铺完matrigel之后，就把感染完了的细胞接种上吗？
* h' B5 b0 c! p3 y, }8 L& m, y那培养液用的是ES完全培养液，还是conditioned培养液？
9 Z$ {7 s7 r( C. E3 v我试过了，KSR media培养的MEF，跟用普通血清培养的形态差不多，不过一旦加上fgf之后就变脏了。$ P. L. O5 h/ q$ q% V( M) I8 s  p

yuhaoze

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. M) B$ C# m' s9 p* z, j这是图片

yuhaoze

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' k/ {5 \! N% u( d, N1 S: c% T3 I6 E5 Q
图片
* _: b* }$ Q) ~2 W7 R

yuhaoze

怎么传不上图了呢

Jonathan

回复 yuhaoze 的帖子' V# S, k* i' R) y3 \0 G; @2 F

2 _5 X/ M( V& s! l% x6 C你说的ksr和普通血清的MEF，要养一段时间，就会发现MEF变细长，看起来好像营养不良的样子。然后培养基会有点脏，可能是因为死细胞多了，细胞碎片多的原因。因为KSR media里面是用血清替代物，所以养分不够。感染后的细胞，直接种在matrigel coated plate里面，开始两天可以用你原来细胞的培养基。第三天再换mTeSR1或者E8，或者conditioned media。我推荐前两个。