饲养层加fgf后，细胞形状变长，变细，培养液很脏

yuhaoze

诱导ips的时候用的饲养层，确定了没有支原体污染，用MMC处理之后，不加fgf的时候细胞挺好的，加了fgf细胞形状就变得细长，而且很多细胞碎片，这样正常吗？会影响ips诱导吗？

king8

问题不大，我也经常会碰到这样的现象

yuhaoze

回复 king8 的帖子  H6 b7 W: q1 `0 w$ w
5 f- i) k* ]' X6 r0 z
谢谢！

yuhaoze

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, [  i% P5 u- f" r. G4 n$ s! ?) n2 e2 S; [8 G+ H
那诱导的时候，是将病毒感染后的细胞接种到MEF之后，第二天换带有fgf的ES培养液吗？还是过几天再换？

Jonathan

回复 yuhaoze 的帖子0 y4 ~1 B* E$ C$ e) w' ~
& D5 D; ?1 _+ c8 r& J' z% S( o: I
MEF变细长是因为你换了KSR media的原因，不是因为其中带了bfgf。一般是接种到MEF之后，隔1-2天换成KSR media，也就是普通的human ES standard media。你也可以试试用coat 了matrigel的6-well plate试一试，不用feeder，这个方法我试过N次，屡试不爽，很好用。

yuhaoze

回复 Jonathan 的帖子1 S7 [6 M. ~# u6 ]: X5 c2 w

2 B/ \4 z2 g! i我有matrigel，你说的铺完matrigel之后，就把感染完了的细胞接种上吗？
, s9 I5 j2 r1 a5 B那培养液用的是ES完全培养液，还是conditioned培养液？
/ @; Z( ]% Q  d3 r+ E$ m我试过了，KSR media培养的MEF，跟用普通血清培养的形态差不多，不过一旦加上fgf之后就变脏了。7 g# k' ~6 Q+ T* E6 n) S

yuhaoze

回复 Jonathan 的帖子8 K1 |! {: o8 I) ]; O. f9 X

% z1 o3 s6 @! o: p3 g这是图片

yuhaoze

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  P0 o; z% q$ ?7 F" \  c图片
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yuhaoze

怎么传不上图了呢

Jonathan

回复 yuhaoze 的帖子, `0 o+ P* V/ T. V7 c6 C9 t; f
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你说的ksr和普通血清的MEF，要养一段时间，就会发现MEF变细长，看起来好像营养不良的样子。然后培养基会有点脏，可能是因为死细胞多了，细胞碎片多的原因。因为KSR media里面是用血清替代物，所以养分不够。感染后的细胞，直接种在matrigel coated plate里面，开始两天可以用你原来细胞的培养基。第三天再换mTeSR1或者E8，或者conditioned media。我推荐前两个。