饲养层加fgf后，细胞形状变长，变细，培养液很脏

yuhaoze

诱导ips的时候用的饲养层，确定了没有支原体污染，用MMC处理之后，不加fgf的时候细胞挺好的，加了fgf细胞形状就变得细长，而且很多细胞碎片，这样正常吗？会影响ips诱导吗？

king8

问题不大，我也经常会碰到这样的现象

yuhaoze

回复 king8 的帖子4 n$ n1 p' H6 K7 m& k
8 [/ v9 H% Z. @
谢谢！

yuhaoze

回复 king8 的帖子- [$ X( ], K# N; `# f, \
$ f, ^) N0 C& M# h
那诱导的时候，是将病毒感染后的细胞接种到MEF之后，第二天换带有fgf的ES培养液吗？还是过几天再换？

Jonathan

回复 yuhaoze 的帖子1 {: C( R6 M8 v0 |( X

. S, [( v, T, e/ E+ {% WMEF变细长是因为你换了KSR media的原因，不是因为其中带了bfgf。一般是接种到MEF之后，隔1-2天换成KSR media，也就是普通的human ES standard media。你也可以试试用coat 了matrigel的6-well plate试一试，不用feeder，这个方法我试过N次，屡试不爽，很好用。

yuhaoze

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  K% Z, ^0 _1 s2 M. i/ p/ N
- o0 p0 P9 R* t1 X$ M$ }" b我有matrigel，你说的铺完matrigel之后，就把感染完了的细胞接种上吗？
) P8 d# i+ P9 I# B那培养液用的是ES完全培养液，还是conditioned培养液？
0 b/ O7 ]5 S' V# K+ R6 q我试过了，KSR media培养的MEF，跟用普通血清培养的形态差不多，不过一旦加上fgf之后就变脏了。
  t' Q+ w! r! ?$ ^: N0 z) A' @6 m

yuhaoze

回复 Jonathan 的帖子. C& }" J' m# G$ O0 L9 N0 W$ {

7 v; s% `, g( x3 g  w- ?这是图片

yuhaoze

回复 yuhaoze 的帖子6 _9 @/ [4 t% t) k; t

( {) w: ?/ r1 b2 t6 s) W6 q$ ?+ Q0 F图片6 \; ?. ?+ g" ?+ d! ^: a6 _0 |

yuhaoze

怎么传不上图了呢

Jonathan

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% Z. g4 E# y* H# d2 p4 t6 ~9 u- P' v4 }) S$ o
你说的ksr和普通血清的MEF，要养一段时间，就会发现MEF变细长，看起来好像营养不良的样子。然后培养基会有点脏，可能是因为死细胞多了，细胞碎片多的原因。因为KSR media里面是用血清替代物，所以养分不够。感染后的细胞，直接种在matrigel coated plate里面，开始两天可以用你原来细胞的培养基。第三天再换mTeSR1或者E8，或者conditioned media。我推荐前两个。