请教大家一个有关阻断信号通路的问题

monk125

这是求步骤的吗？ 看你写这个是用lipo2000脂质体做的瞬转吧？
+ `' l8 T* N9 K! J  L/ l8 e你买lipo2000的时候会送你操作步骤的，这个你放心好了，上面很具体8 ]6 B3 ~- L- Y  ]1 J
还有就是培养基的问题 转染所用的培养基是无血清的培养基 跟你你养该株细胞的培养基一样的 不过是无血清的 但是 实际上只是混合液是无血清的 你的细胞还是预留一部分完全培液的
6 g" M1 y' Q; y5 M一般的步骤是
0 }) Q' K- n, @: I, E1 o* o1 转染前换新培液
% K: X7 l) [5 f2 lipo2000与无血清培液混合静置5min 同时质粒或者siRNA与无血清培液混合静置5min2 X9 u/ w8 h3 r$ ?* [
3 上述两种混合液一起混合 并静置20min+ b3 u1 q; c" r' S2 `
4 转染细胞4-6h后换新培液) E: k* h( d) e5 {" H/ B
( v8 J0 p' B% i- r. [7 w
注意：做好control 对照试验 培液要先预热 细胞不要长太满，切提前一天铺板

monk125

回复 ind6562 的帖子: ~9 l% U$ Y8 A5 k" `

9 e. U$ C& [% F2 {siRNA 就没办法做转染效率检测了，像质粒形式的shRNA是可以做效率检测的，比如你control 组的空白质粒上有GFP荧光标记，你可以做几组不同的浓度梯度，然后流式或荧光显微镜 看你的GFP positive那群细胞的比例，在某范围内应该成线性的，你就知道大致效率了。

monk125

回复 ind6562 的帖子
7 o, R6 u6 P0 z6 s* O) T" [, i4 X% ]4 q
siRNA 的效率怎么测 我也不懂 只能你设好梯度后 收细胞测靶基因mRNA浓度的变化了，做个realtime 就知道了