外周血造血干细胞提取求助

李超越

哪位好心人能给我发一份利用未经处理的普通人的50毫升外周血提取造血干细胞的具体实验方法。

HHvivian

两个步骤：
$ C, l9 J& S& R5 i- o; Y1.单个核细胞的分离
6 o% _5 a2 q) h0 |+ g（1）        在10ml或50ml离心管中加入Ficoll，细胞悬液小心加至分离液液面上。
- B& [/ m5 f% Y+ f' K（2）        500g离心25min。分离液和培养基间有一层细胞，小心取出中间层，用培养基稀释至少五倍。+ {' Z+ K7 o( n, |5 r  m
（3）        500g离心10min，PBS洗一遍，得到的细胞沉淀即为MNC。
$ p* y' o+ K0 ]+ `2 g2.        CD34的分离
8 E1 y! h* E2 C4 N（1）        MNC与鼠抗人CD34单克隆抗体共同冰浴30min。& Y% X5 b' d. M! I
（2）        洗涤3-4次，重悬，并调整细胞浓度5*106ml。5 |" d0 _3 K; b/ v6 K' }* i8 u% C
（5）        细胞分选仪分选0 _3 L$ a; r3 x! g, M

HHvivian

加ficoll之前，还要用PBS或者生理盐水按1:1或者1:2稀释 血

禁虚度

有些可以先用HES 沉降红细胞再用淋巴细胞分离液来分离，效果挺好的