求助初养大鼠骨髓间充质干细胞，哪位高手指点一下如何测细胞周期啊？

yinfuhua

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请参考下我看到的这篇，转载给你，看能否有些帮助。
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流式细胞周期检测' z5 `4 n+ u5 W% u* |/ w0 G! z

) @7 h# O! k2 B1 Q) ?( v流式细胞周期结果图解读(附图详解)Time：2010-12-07 PM 19:03　　Author:bioer　　Hits: 51 times 　
4 Y" a. S6 N/ f. _5 `% j8 T流式检测细胞周期操作步骤; r0 G7 j  [$ o$ x" x( H
1. 细胞培养：
) P+ ~; u% x# O) t' s8 h' E
4 w. a! p3 u9 n1 g- I5 w　　取对数生长期的细胞，按1×106cells/ mL以1mL接种24孔板或2mL接种于6孔板内，进行所需的处理（比如加入药物），特定时间后终止培养，进行下一步的实验。& T! t: P: j# d/ I) H- i
2. 细胞固定：
/ Q1 I6 ?, m! v# |　　800rpm离心5min，收集细胞沉淀，弃上清，用预冷PBS洗涤两次，加入预冷75%乙醇，于4℃固定4h以上。
. T$ y. X4 W$ B1 B' t3. 细胞染色：
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　　1500rpm离心5min，弃上清，以3mL的PBS洗涤一次，加入400uL溴化乙锭（PI，50ug/mL），100ul RNase A（100ug/mL ），4℃避光孵育30min。- h9 n) G. k, s2 a0 o* g0 X
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4. 流式分析：. R  H  M# O% V% z
　　以标准程序用流式细胞仪检测，一般计数2~3万个细胞，结果用细胞周期拟和软件ModFit分析。) h! R& d' {" W+ L  ^  J/ _3 Q3 D
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注：上机前要以50um尼龙网膜或35um细胞过滤器过滤细胞！因为PI具有很强的粘附性，容易使细胞聚团！
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流式细胞周期结果图解读　  5 Y! b( @. Y# e9 q5 {
首先来认识一下流式细胞周期结果图：7 W- X* r: ]6 M
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! I6 W$ j$ D/ I+ B/ {/ H　　1、纵坐标Cell Number：即计数的有效细胞数；3 x: ~1 q" U9 r6 V; @& w& G9 b
　　2、横坐标DNA Content：即DNA含量；
3 j6 S  C$ }7 R4 i- _3 h　　3、G1、G2、S三期在图中已经标示；
, u3 {$ o7 B7 _$ o: _　　4、右侧数字含义：Dip G1-53.84% at 55.56，即G1期DNA含量平均值为55.56；53.84%即G1期细胞数占总数的53.84%；Dip G2-5.64% at 107.72，即G2期DNA含量平均值为107.72，5.64%即G2期细胞数占总数的5.64%；以此类推…   
; y! s, l0 C$ u9 F) z- b# \7 p) f流式细胞周期结果图的意义，主要从细胞周期的角度看各参数的意义：0 f) r+ D/ h, N3 t9 }9 j/ C6 `
1、细胞周期指由细胞分裂结束到下一次细胞分裂结束所经历的过程，所需的时间叫细胞周期时间。  e  W, E  e* v
9 b6 b! S, R5 P
　　可分为四个阶段：2 x8 \9 g- C; H9 }( w& u
' D: G2 c3 ~- t% {% H7 m
　　　　　　5 k: J2 r3 q% c/ F# A5 ~
　　① G1期(gap1)，指从有丝分裂完成到期DNA复制之前的间隙时间；
7 f1 i8 @0 ]1 B! ]* w　　② S期(synthesis phase)，指DNA复制的时期；( i+ Q' V9 `0 o
　　③ G2期(gap2)，指DNA复制完成到有丝分裂开始之前的一段时间；
; q% h8 Y2 l+ B& z+ y% T3 v　　④ M期又称D期(mitosis or division)，细胞分裂开始到结束。
* p7 u- @, Z: g$ [2、从增殖的角度来看，可将高等动物的细胞分为三类：
( s- w; v8 ^; g* G2 J0 U　　①连续分裂细胞，在细胞周期中连续运转因而又称为周期细胞，如表皮生发层细胞、部分骨髓细胞。. K) w% p6 }' l+ |) ?3 e
　　②休眠细胞暂不分裂，但在适当的刺激下可重新进入细胞周期，称G0期细胞，如淋巴细胞、肝、肾细胞等。8 y$ g; s- ~: N" k6 O
　　③不分裂细胞，指不可逆地脱离细胞周期，不再分裂的细胞，又称终端细胞，如神经、肌肉、多形核细胞等等。
2 ~+ {; E5 Z6 G: Q2 S　　细胞周期的时间长短与物种的细胞类型有关，如：小鼠十二指肠上皮细胞的周期为10小时，人类胃上皮细胞24小时，骨髓细胞18小时，培养的人成纤维细胞18小时，CHO细胞14小时，HeLa细胞21小时。不同类型细胞的G1长短不同，是造成细胞周期差异的主要原因。" J( b2 I! T7 o  m" N' Y  h8 N* }
3、流式细胞结果图各参数的意义：
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  S" z( j" b5 n3 k0 t. d 　　　　　, B# N' T1 V* I; M! q2 o
　　常用的流式细胞术分析细胞周期的方法是依据细胞DNA含量（横坐标）来分析的：
" J! b. R* v; L1 X( X7 v　　G1期：DNA复制还没开始，也是DNA含量最少的，即流式检测结果图的第一个峰；+ E+ r/ o) e: c5 E3 o  y
　　S期：DNA开始复制，到完成复制，是一个一倍DNA到二倍DNA的过程，在流式结果图中显示期跨度特别大（第二个不高但很宽的峰）；! `) r* l! ~4 @0 K& Y
　　G2期：DNA复制完成至分裂的一段时间，此时细胞内含二倍DNA，在流式结果图中的第三个峰；
; j; k, ?  N  }7 d　　M期：细胞分裂过程，此时细胞内也是二倍DNA，用DNA含量的方法是无法与G2期分开，所以有第三峰明显升高时报告：G2/M期阻滞。/ f/ d7 w& N; c& Z9 O; z