病毒感染细胞没有荧光，但检测有外源基因的表达

jiaocuihua123

我用pLM慢病毒载体，转染293ft细胞生产病毒，然后用其感染细胞，但是没有荧光，然后提取细胞RNA，反转录，经行PCR，发现有外源基因的表达，请问为什么会没有荧光呢，是载体出了问题吗，请大家指教。

zmfang555

GFP有可能表达了，但是弱阳性，另外RT你做阴性对照没有？也可能是本底。

三木一叶

定量出来的数据，你没有一个对照样品，毫无意义。你应该做一个anti－gfp 的wb，看看蛋白有没有表达。

三木一叶

回复 neuralstem 的帖子2 M5 }8 y+ ?# J9 J0 H

3 I1 _0 [6 G3 r( D" L& G" S/ ]抗体染一下是啥意思呢？做western？还是加抗体到培养基里面去诱导一下？

jiaocuihua123

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* D. R8 U8 m, t# a/ o+ P5 e; C: G& E
做了，不感染的确实没有外源基因的表达

jiaocuihua123

回复 sizhengliu 的帖子
9 r/ a3 ^  M6 i  m
8 x9 k  u* g* O恩，估计是吧，再到网站上查的时候已经查不到质粒信息啦，被骗了呀

prophe

+ c$ |/ w' [& w# D1 n  t5 ~9 Q: O# q% y) Z; N: K5 J2 E; m6 ]
也有可能目的基因在细胞有本底表达，建议做一个不感染的作对照。

neuralstem

用抗体染一下可能就看见GFP了
, S7 ]- z! o: d: b) z

sizhengliu

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* n( s6 a) `- |5 ^" n+ E/ ^" V' c7 i1 T
这就可以解释了，部分载体只表达了目地序列，到gfp序列时表达已经很弱，因此，你观察不到

jiaocuihua123

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+ \8 l, T( Q5 |
1 o$ D, C. O- p# _$ K$ k不好意思,我记错了,荧光序列是在目的系列之前,通过P2A相连.谢谢.