病毒感染细胞没有荧光，但检测有外源基因的表达

jiaocuihua123

我用pLM慢病毒载体，转染293ft细胞生产病毒，然后用其感染细胞，但是没有荧光，然后提取细胞RNA，反转录，经行PCR，发现有外源基因的表达，请问为什么会没有荧光呢，是载体出了问题吗，请大家指教。

misser217

同问……

sizhengliu

你的gfp序列是在目的基因序列后，还是前？

daviddow

我也遇到这种问题，既然有表达了就下续试验吧。可能和你载体有关，不是大公司的载体，可能就存在这种问题。

jiaocuihua123

回复 sizhengliu 的帖子- J% }- g7 M) ]1 x3 }) ~7 x5 o
  y( z3 ]; U2 @0 E
是在目的基因之后,用2A连在一起的,谢谢.

jiaocuihua123

回复 daviddow 的帖子& C4 v4 Y' U( E) Q
  _: M# v. ~: X8 H8 d! K
嗯,但是想用阳性的细胞做克隆,所以没有荧光的话没法保证阳性率,只能是盲做.所以很麻烦,是不是载体变异了呢?

jiaocuihua123

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+ ?3 X: @  ]1 V7 W& K: b4 J7 H& P; ?8 T" a4 N
不好意思,我记错了,荧光序列是在目的系列之前,通过P2A相连.谢谢.

sizhengliu

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- K% E- x# B* z# ?: V, X: |5 O3 i* n( d4 d: v, z
这就可以解释了，部分载体只表达了目地序列，到gfp序列时表达已经很弱，因此，你观察不到

neuralstem

用抗体染一下可能就看见GFP了
: s$ T- K: J0 c. |- y' O7 p

prophe

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* _7 @+ E) a7 K4 q% o7 N( c  i" q也有可能目的基因在细胞有本底表达，建议做一个不感染的作对照。