关于NK的讨论

ljl1988115

不知有没有做过NK细胞的同学，不知道大家是怎么养的？希望做过的同学能解答一下，我看文献上有用滋养层细胞的，不知是什么情况，有做过的讨论一下吧！

wwxx66

国外做的很多都是用饲养层细胞养的，K562细胞经基因工程改造，可以表达一些膜分子，在膜分子的的作用下，NK细胞可以大量的增增殖，最大扩增倍数可达到21000倍！国内也有很多专利讲到这些东西。你可以去国家专利局网站上查找。

weijunning

可以不用饲养层；选用德国产的一种用于NK细胞培养基（比较贵，2000元/瓶，500ml/瓶），选用关键细胞因子IL-2，OK432，可以进行很好的NK细胞培养。

永远的伊凡

回复 weijunning 的帖子* g' {+ p( P) P9 B4 i) f
) K/ F: \, ^- q
能不能讲具体点呢，像需要加的因子的量、加的时间先后等等

yangpan521

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* x6 l" {, y% J# a
+ o) }) i8 a1 l- {能不能发一些相关的信息呀，比如饲养层的选择、因子的浓度等 最好有相关的文献 谢谢

weijunning

回复 永远的伊凡 的帖子# l4 z9 a. h0 }* P! ~8 Z& F
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OK432有配套的溶剂去溶解，1g用一支配套的溶剂去溶解就行，配出来的是1000X母液；需要铺细胞当天加；IL-2的工作浓度为1000ug/ml  在当天加；之后扩瓶培养基只加IL-2因子就行。

永远的伊凡

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+ t# C( _7 _3 W0 N很有用，谢谢！

zhenhuale

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& a- k" j  j7 ?( W7 m# B我用德国的培养基和OK432都试过培养  有文章也报道过该种培养方法0 T' r7 {* r, F; }/ Y# R
但是培养效果不理想，请问您培养多少天可以得到多少的细胞量，CD3-CD56+比率多少？谢谢！

weijunning

回复 zhenhuale 的帖子% M" |, |* A/ }/ e/ D
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我们正是用此方法培养的NK。一般在第10天才开始进入快速增殖期，之前增长比较缓慢；由于其对数生长期滞后，回输我们定在第15天，这时细胞数能达到2.0X109左右。CD3+CD56+一般在35%左右。

ljl1988115

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: _$ M1 |1 y( a0 o8 lNK的表面标志抗原应该是CD3-，CD56+吧，双阳的话不就是NKT了吗