关于NK的讨论

ljl1988115

不知有没有做过NK细胞的同学，不知道大家是怎么养的？希望做过的同学能解答一下，我看文献上有用滋养层细胞的，不知是什么情况，有做过的讨论一下吧！

wwxx66

国外做的很多都是用饲养层细胞养的，K562细胞经基因工程改造，可以表达一些膜分子，在膜分子的的作用下，NK细胞可以大量的增增殖，最大扩增倍数可达到21000倍！国内也有很多专利讲到这些东西。你可以去国家专利局网站上查找。

weijunning

可以不用饲养层；选用德国产的一种用于NK细胞培养基（比较贵，2000元/瓶，500ml/瓶），选用关键细胞因子IL-2，OK432，可以进行很好的NK细胞培养。

永远的伊凡

回复 weijunning 的帖子
& y; w  }0 V9 x& A5 f% n; j
' X+ Q+ G6 P9 t能不能讲具体点呢，像需要加的因子的量、加的时间先后等等

yangpan521

回复 weijunning 的帖子
- B+ X7 a/ l9 B, n3 ^4 f9 e2 I! [8 a( e8 W
能不能发一些相关的信息呀，比如饲养层的选择、因子的浓度等 最好有相关的文献 谢谢

weijunning

回复 永远的伊凡 的帖子
" X: P: d" _7 k6 {6 x; u) p' y4 t! }- V& s$ X
OK432有配套的溶剂去溶解，1g用一支配套的溶剂去溶解就行，配出来的是1000X母液；需要铺细胞当天加；IL-2的工作浓度为1000ug/ml  在当天加；之后扩瓶培养基只加IL-2因子就行。

永远的伊凡

回复 weijunning 的帖子: R$ u6 a1 |! F7 S

7 w! L" {8 `  X1 W8 o% A4 g0 I9 X很有用，谢谢！

zhenhuale

回复 weijunning 的帖子
( `  t. a% D/ V8 T" [& E; l* e! b5 b' V6 W3 K' {4 Q9 p1 h7 N
我用德国的培养基和OK432都试过培养  有文章也报道过该种培养方法
- S1 i4 T* w  Q- s, w但是培养效果不理想，请问您培养多少天可以得到多少的细胞量，CD3-CD56+比率多少？谢谢！

weijunning

回复 zhenhuale 的帖子# [+ G0 r/ T4 [7 Q* B
: v4 ~( v4 w& Z- e
我们正是用此方法培养的NK。一般在第10天才开始进入快速增殖期，之前增长比较缓慢；由于其对数生长期滞后，回输我们定在第15天，这时细胞数能达到2.0X109左右。CD3+CD56+一般在35%左右。

ljl1988115

回复 weijunning 的帖子
1 F9 Y+ L; B  ]. r
. K: o9 y+ B! }: I1 [NK的表面标志抗原应该是CD3-，CD56+吧，双阳的话不就是NKT了吗