荧光二抗效价1:10是指稀释比例吗

请叫我晓白

我买的羊抗大鼠荧光二抗说明书上写的工作效价是1:5-10 是指用的时候按1:5-10稀释吗
1 `7 x1 S& N: y这个浓度会不会太高了啊$ s$ N/ k1 ?: h* H8 k0 D1 B' a2 W. ~
另外二抗要求-20度保存
' x( I) Z5 @! t8 b% b9 R如果我最近一周经常用可否在4度保存一周呢？* T( B5 l+ z, p! I, H3 U
用之前需要离心吗？

hbs08230

1:10 稀释出来不会爆么？？我们组用的萤光二抗是要稀释1:5000的。
6 p! {+ C) n, f4 G6 H. L先做一个梯度测试一下吧，1:10，1:100，1:500，1:1000，1:5000。 & N, t- [# l& H8 f) \0 _$ X) g$ J
有一个东西叫liquid blocker，像一支笔一样，可以在载玻片上圈上sample，然后在圈内加上抗体时液体不会溜出去~~最多用8ul就能覆盖一个sample了·省点3ul都能染~

Life_Tech

回复 请叫我晓白 的帖子7 M$ j' l' b2 c# p0 ~) @
+ d1 ]) C) H/ J0 |* n3 o
也不是严格的说需要多少，只要你确保片子不要干了就行。有时候为了省抗体加得少也是可以的。如果你是在37度孵育尤其要注意了。

请叫我晓白

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- K8 `/ m7 x/ J6 `. D
0 B/ ]$ Y0 [; p# y% M; [一张片要200ul吗？可是我之前做的片50ul二抗就覆盖了心脏组织了。如果按每张片50ul的话，我做8张片需要400ul，也就是二抗40ul。是否是我之前的二抗加少了才会出不了结果呢？

Life_Tech

回复 请叫我晓白 的帖子! C$ A7 H1 [# W$ x8 [6 D

( d$ t4 J) Z# u2 x6 U+ v' ~6 }由于你的稀释比例太低，一张片子最少要加200-300ul才能覆盖，如果按照你的1:10的稀释比例，每次最少要用20-30ul。主要根据你的实验来吧，如果一次做的片子多，可以直接分成两管就可以了。如果每次做一张可以分装成100ul每管的，每管用个三四次。
4 r; a' |  |1 @' a  H! r& D1 X' t" z% v# c$ Z& b/ t
分装是不稀释的，尤其是你现在的效价已经不高的情况下。用的时候再根据你要用的量吸出来稀释。' B% L7 y) l. @1 g

2 \" V' ]0 R/ `( _/ I以上都是个人经验供参考，不代表公司官方言论。

请叫我晓白

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1 u7 s3 M( ~2 S0 G) q5 V8 I3 \( d: t' q, H
原来的规格是0.5ml，一般分装多少ul一管呢？2 W3 }% |2 h! u
如果分装需要稀释吗？如果不稀释会不会很少

axh

可以加等体积甘油，这样放-20度还是液体状态，拿出来用了再放回，不存在反复冻融。但切记取用时混匀，因为甘油密度大，易沉底。

Life_Tech

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7 Y* N  g2 ^4 D  n8 w$ ?4 D& e: ?. b- l1 ~  j2 d
1:5-10是稀释比例，但是这样稀释比例做出来一般背景都会比较高，应该说不是很理想的抗体。我们只有自己制备的抗体出现过这种情况，商业化的很少用这种稀释比例的。* {4 e. Y) W, R; g; [" d, C& B
4度存放一般问题不大，但是本来效价就不高，不建议你放4度。如果实在要放，建议你分装成小管的，将小管的放4度，如果不好用了再解冻其他分装的小管。

youlesi888

可以放

huangcong1988

说明书上写的是1:5~1:10的话，您就按照这个比例稀释就行了啊，不过一般二抗的稀释度是100~200，如果长时间要是用的话，放4度放一周后也没有问题