荧光二抗效价1:10是指稀释比例吗

请叫我晓白

我买的羊抗大鼠荧光二抗说明书上写的工作效价是1:5-10 是指用的时候按1:5-10稀释吗
9 `0 G6 b6 ^# V' S/ c6 ^这个浓度会不会太高了啊* D3 ]) C6 E, Q" b" x8 S$ S- ^
另外二抗要求-20度保存* _4 X' b5 o$ ^. n/ H" j
如果我最近一周经常用可否在4度保存一周呢？
2 S9 R* B4 ~' h! M3 Y% v, }用之前需要离心吗？

huangcong1988

说明书上写的是1:5~1:10的话，您就按照这个比例稀释就行了啊，不过一般二抗的稀释度是100~200，如果长时间要是用的话，放4度放一周后也没有问题

youlesi888

可以放

Life_Tech

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2 k" G8 r' `; w% i, K; e. X0 T9 {2 w* O+ V( M! G- i( U
1:5-10是稀释比例，但是这样稀释比例做出来一般背景都会比较高，应该说不是很理想的抗体。我们只有自己制备的抗体出现过这种情况，商业化的很少用这种稀释比例的。
( Y) T9 Z7 G% A# k2 R4度存放一般问题不大，但是本来效价就不高，不建议你放4度。如果实在要放，建议你分装成小管的，将小管的放4度，如果不好用了再解冻其他分装的小管。

axh

可以加等体积甘油，这样放-20度还是液体状态，拿出来用了再放回，不存在反复冻融。但切记取用时混匀，因为甘油密度大，易沉底。

请叫我晓白

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1 B7 [3 M  O9 ^5 n5 f: G3 v4 h
原来的规格是0.5ml，一般分装多少ul一管呢？
( [( u( E6 R- ~3 U7 _2 v0 V* g如果分装需要稀释吗？如果不稀释会不会很少

Life_Tech

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由于你的稀释比例太低，一张片子最少要加200-300ul才能覆盖，如果按照你的1:10的稀释比例，每次最少要用20-30ul。主要根据你的实验来吧，如果一次做的片子多，可以直接分成两管就可以了。如果每次做一张可以分装成100ul每管的，每管用个三四次。$ s5 O6 `+ P; h
: A1 @0 ~7 i# d6 }' i* L6 ]
分装是不稀释的，尤其是你现在的效价已经不高的情况下。用的时候再根据你要用的量吸出来稀释。* r4 V9 Q7 |* `' `3 V: i% I" t) O
* H) L) C0 k; C+ v. X
以上都是个人经验供参考，不代表公司官方言论。

请叫我晓白

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. k. P: r2 d6 ^2 y9 U' U7 z" Q8 N3 W5 O
一张片要200ul吗？可是我之前做的片50ul二抗就覆盖了心脏组织了。如果按每张片50ul的话，我做8张片需要400ul，也就是二抗40ul。是否是我之前的二抗加少了才会出不了结果呢？

Life_Tech

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& R( o/ s' M. a5 d. j
( D; {" _- [- |7 b也不是严格的说需要多少，只要你确保片子不要干了就行。有时候为了省抗体加得少也是可以的。如果你是在37度孵育尤其要注意了。

hbs08230

1:10 稀释出来不会爆么？？我们组用的萤光二抗是要稀释1:5000的。1 Y' n2 Z& E  g& a9 y( ]5 y- A
先做一个梯度测试一下吧，1:10，1:100，1:500，1:1000，1:5000。 5 e$ V' h/ }1 A+ _
有一个东西叫liquid blocker，像一支笔一样，可以在载玻片上圈上sample，然后在圈内加上抗体时液体不会溜出去~~最多用8ul就能覆盖一个sample了·省点3ul都能染~