小鼠BMSC

沁蓝之城

原代细胞，现在已经是第六天了，但是细胞还是长的很小，还是圆型的，没有梭形的出来。用的是5周龄左右的小鼠，方法是参考论坛上的培养方法

ruth891005@yaho

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" u& a% x5 c2 J5 y$ u! m9 d* ?7 @非常感谢！

shagu

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0 C2 ^* S7 n& b. b1 Z- b6 l3 @5 r1 M! i1、我培养都是48小时半换液，长得挺好，杂细胞多，得多传几代。
( e+ O# ^0 [% T& u# J2 i* b$ G4 D2、至于接种密度，和你每次的操作有很大关系，比如冲洗骨髓腔是否干净，剪干骺端的多少（大部分细胞聚集在干骺端），离心的转速和时间。

ruth891005@yaho

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% Q4 X! p- B4 ~& J
. M6 A) |' Y& h, g# T, m请问首次换液是在什么时候比较好？我一般在三天的时候换
5 e; m5 w: @. q" F如果一只小鼠接种一瓶密度有点大，那多大的接种密度合适呢？$ S, X4 _. T, G8 N( O0 |
谢谢赐教！

menghy

我觉得可以考虑接种6孔板，分成几孔接种，降低接种密度，毕竟每一只小鼠还是存在个体差异。血清原代培养的时候还是应该考虑20%的。

沁蓝之城

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* _1 y8 A8 j, w* @
我是一只小鼠接种一瓶，应该不算大吧；我首次换液是24小时，但是我前面有一次养的也是24小时换液，长的挺好的；试剂和血清都是新买的，血清是用的10%

shagu

1、是不是你接种密度太大了，骨髓中MSC本就极少，密度太大而瓶底面积有限，会抑制细胞增殖与伸展。3 p& }$ K' D2 u0 s' d/ t
2、首次换液时间太早，细胞增殖速度就会减慢，如果你是24h全换液，就耐心的再等等吧！: U' N9 P7 x. B. ^$ |
3、再者你用到的试剂检查一下有没有过期的，尤其是血清，你加的百分比是不太小了。