小鼠BMSC

沁蓝之城

原代细胞，现在已经是第六天了，但是细胞还是长的很小，还是圆型的，没有梭形的出来。用的是5周龄左右的小鼠，方法是参考论坛上的培养方法

shagu

1、是不是你接种密度太大了，骨髓中MSC本就极少，密度太大而瓶底面积有限，会抑制细胞增殖与伸展。
" B$ B% ~- n% z3 G. |% z4 {2、首次换液时间太早，细胞增殖速度就会减慢，如果你是24h全换液，就耐心的再等等吧！
9 k, f2 m4 q4 C+ d9 u. ^7 W' F! Q3、再者你用到的试剂检查一下有没有过期的，尤其是血清，你加的百分比是不太小了。

沁蓝之城

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: n" w4 }! @9 w  }3 C# a1 M7 j: O我是一只小鼠接种一瓶，应该不算大吧；我首次换液是24小时，但是我前面有一次养的也是24小时换液，长的挺好的；试剂和血清都是新买的，血清是用的10%

menghy

我觉得可以考虑接种6孔板，分成几孔接种，降低接种密度，毕竟每一只小鼠还是存在个体差异。血清原代培养的时候还是应该考虑20%的。

ruth891005@yaho

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" |9 n4 o1 K/ L: e& L' I& V' T0 f9 T. Q5 P4 n" a
请问首次换液是在什么时候比较好？我一般在三天的时候换
6 I7 H+ {9 A* s) M6 h' T( L如果一只小鼠接种一瓶密度有点大，那多大的接种密度合适呢？
5 |. T# a% S! @1 _8 o谢谢赐教！

shagu

回复 ruth891005@yaho 的帖子1 `3 P5 z- p- `
" W1 n# q, G, ^# c1 L- E
1、我培养都是48小时半换液，长得挺好，杂细胞多，得多传几代。$ {) }" i( `+ v, j
2、至于接种密度，和你每次的操作有很大关系，比如冲洗骨髓腔是否干净，剪干骺端的多少（大部分细胞聚集在干骺端），离心的转速和时间。

ruth891005@yaho

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  r0 Z9 V8 ?- ~: Q3 o5 z% X( |6 e* ?- S/ i, l6 z* q: N% |
非常感谢！