小鼠BMSC

沁蓝之城

原代细胞，现在已经是第六天了，但是细胞还是长的很小，还是圆型的，没有梭形的出来。用的是5周龄左右的小鼠，方法是参考论坛上的培养方法

shagu

1、是不是你接种密度太大了，骨髓中MSC本就极少，密度太大而瓶底面积有限，会抑制细胞增殖与伸展。
) z8 _: U8 ]* ^* Y' F2、首次换液时间太早，细胞增殖速度就会减慢，如果你是24h全换液，就耐心的再等等吧！
5 A- v' O% V" v' k1 W+ Q3、再者你用到的试剂检查一下有没有过期的，尤其是血清，你加的百分比是不太小了。

沁蓝之城

回复 shagu 的帖子6 P& V. N) g; E6 u* h* n/ K
1 K0 d: r8 b. }# g1 {
我是一只小鼠接种一瓶，应该不算大吧；我首次换液是24小时，但是我前面有一次养的也是24小时换液，长的挺好的；试剂和血清都是新买的，血清是用的10%

menghy

我觉得可以考虑接种6孔板，分成几孔接种，降低接种密度，毕竟每一只小鼠还是存在个体差异。血清原代培养的时候还是应该考虑20%的。

ruth891005@yaho

回复 shagu 的帖子" x$ |# a# [* ?' Y7 o

2 i" z+ }6 p, r  j7 f8 e) q( }请问首次换液是在什么时候比较好？我一般在三天的时候换
% ?" d5 g- G6 E% K0 i如果一只小鼠接种一瓶密度有点大，那多大的接种密度合适呢？. h# t0 t: m2 a1 f, W. X
谢谢赐教！

shagu

回复 ruth891005@yaho 的帖子
0 a, L- b$ x* {1 U: Z4 e) J. v" J. \6 Q$ K8 R
1、我培养都是48小时半换液，长得挺好，杂细胞多，得多传几代。
& l! `! _- L9 d2 f' I5 Q9 J7 c2、至于接种密度，和你每次的操作有很大关系，比如冲洗骨髓腔是否干净，剪干骺端的多少（大部分细胞聚集在干骺端），离心的转速和时间。

ruth891005@yaho

回复 shagu 的帖子# _, J5 }- y; t5 [# B" `3 f
: _7 E0 P& g' x+ f# K- M
非常感谢！