小鼠BMSC

沁蓝之城

原代细胞，现在已经是第六天了，但是细胞还是长的很小，还是圆型的，没有梭形的出来。用的是5周龄左右的小鼠，方法是参考论坛上的培养方法

shagu

1、是不是你接种密度太大了，骨髓中MSC本就极少，密度太大而瓶底面积有限，会抑制细胞增殖与伸展。/ w" \5 S$ x& @; p' C( _
2、首次换液时间太早，细胞增殖速度就会减慢，如果你是24h全换液，就耐心的再等等吧！9 D  f& J7 W) ^/ [! {
3、再者你用到的试剂检查一下有没有过期的，尤其是血清，你加的百分比是不太小了。

沁蓝之城

回复 shagu 的帖子
* t+ c) I) q% a# a4 V$ ]; p- {8 W+ F) A! G6 r9 O* |: [
我是一只小鼠接种一瓶，应该不算大吧；我首次换液是24小时，但是我前面有一次养的也是24小时换液，长的挺好的；试剂和血清都是新买的，血清是用的10%

menghy

我觉得可以考虑接种6孔板，分成几孔接种，降低接种密度，毕竟每一只小鼠还是存在个体差异。血清原代培养的时候还是应该考虑20%的。

ruth891005@yaho

回复 shagu 的帖子4 d: V# d4 Q& ]0 z" d7 w

7 J6 G. z+ I0 e8 Q3 Z/ `8 O7 }请问首次换液是在什么时候比较好？我一般在三天的时候换3 Z: P9 {) s+ a' y: G; s: i
如果一只小鼠接种一瓶密度有点大，那多大的接种密度合适呢？
! J2 d# g8 ]# I8 a6 V# g3 [9 l谢谢赐教！

shagu

回复 ruth891005@yaho 的帖子
  N  t2 M! K, Z7 G+ \
8 P$ [. e: d0 }% d% l& p1、我培养都是48小时半换液，长得挺好，杂细胞多，得多传几代。
9 I" K6 ^* [  c& E1 v, O0 F6 G- ?2、至于接种密度，和你每次的操作有很大关系，比如冲洗骨髓腔是否干净，剪干骺端的多少（大部分细胞聚集在干骺端），离心的转速和时间。

ruth891005@yaho

回复 shagu 的帖子
3 K- P+ @: t0 e: ?# m9 ?& E% J3 f! [
非常感谢！