求指点E14

sszxlijin

培养基是DMEM， 15%FBS， 100*glu， 100*neaa ，2-巯基乙醇， 100*PS， LIF。。。 使用0.1%的明胶包被。细胞密度大约7-10万/6孔板单孔" Y8 E3 Y, K# ^) J
1）养的时候细胞克隆较小 而且容易分化 有时复苏一天分化就不较多。。。。。
, C8 M2 c( J5 Y% R2） 还有最近发现有不明黑点。今天检测无支原体污染" R  k6 U  r9 \; O  q( _; ~$ s
细胞状态不是很好  求高手指教6 d$ T' D; e4 N4 `) M$ U# X
8 h9 H5 s% D9 E- S

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山登绝顶我为峰

感觉形态还不错啊

sszxlijin

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一般老是过一天分化就会很严重

mayiwaiwai

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之前也是用这样的培养体系，细胞也是看着分化很严重，楼主可以做个染色看看ES标记，OCT4\SOX2看看有没有分化，有时候看着分化，但干性还是存在的，没有饲养层的是有这样的现象

watchen198891

出现黑点是不是细菌感染了

sszxlijin

回复 mayiwaiwai 的帖子0 f) `' O- e; q: K8 r% x/ N* c
# [+ Y/ a! J1 p6 @# g9 g0 D
谢谢 我试试看看

sszxlijin

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* z& R+ |3 K, e! H# [8 t不太像  一般到后来黑点一直在。也没见大范围爆发

一人日和

无滋养层，3i+lif也有点这样，生长缓慢，后来加滋养层长得就很好。黑点是不是瓶子上的呀

yangcy-smile

我在养E14的时候也出现过这个问题，开始的时候用gelatin包被后培养没有什么问题，体外增殖时间长了，就开始出现这种情况了。是体外培养的问题，用上滋养层恢复恢复就能缓过来，然后可以再次脱离滋养层。

孙帅帅

细胞内部出现很多黑点表示细胞老化，培养基出现可移动的悬浮在培养基中的黑点可能染细菌了！ 我们曾经就遇到过染细菌~~