GFP固定后还能发光吗？ - 实验室综合讨论区干细胞之家



免疫细胞治疗专区	欢迎关注干细胞微信公众号

返回列表

查看: 92575\|回复: 9	go [请教] GFP固定后还能发光吗？ [复制链接]

w343989328

高级会员

Rank: 4

积分: 1013
威望: 1013
包包: 2639

金话筒优秀会员

楼主

发表于 2013-4-16 23:31 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

RT，细胞内表达GFP或者EGFP，经固定后是不是会发生构象变化从而失去发光的功能？或者怎么固定才能维持发光？

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

收藏0 分享0 顶0 踩0

回复引用

举报返回顶部

老十

注册会员

Rank: 2

积分: 58
威望: 58
包包: 351

沙发

发表于 2013-4-17 00:32 |只看该作者

不会的，但是要防止蛋白降解。固定了蛋白就固定了，只要时间不是太久还是可以用的

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 3	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

250286645

注册会员

Rank: 2

积分: 142
威望: 142
包包: 498

藤椅

发表于 2013-4-17 08:59 |只看该作者

之前我做过将GFP质粒接在磷酸钙纳米粒子上面，经过清洗转染后，还是可以表达绿色荧光蛋白，所以应该没有问题吧，只要不破坏质粒的结构

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 3	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 3 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

w343989328

高级会员

Rank: 4

积分: 1013
威望: 1013
包包: 2639

金话筒优秀会员

板凳

发表于 2013-4-17 10:00 |只看该作者

回复老十的帖子

可是为什么我看过别人做IF的时候，显示GFP要用anti-GFP的抗体呢？

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 1	+ 5	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 1 包包 + 5 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

luyue6453

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 535
威望: 535
包包: 851

金话筒优秀会员美女研究员积极份子

报纸

发表于 2013-4-17 10:04 |只看该作者

我做过发荧光动物组织切片，固定后荧光还在。

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

zxcv12345

中级会员

Rank: 3 Rank: 3

积分: 598
威望: 598
包包: 77

金话筒优秀会员

地板

发表于 2013-4-17 10:04 |只看该作者

回复 w343989328 的帖子

乙醇固定不行，甲醛固定了没问题

已有 1 人评分	威望	包包	收起理由
细胞海洋	+ 2	+ 10	欢迎参与讨论

总评分: 威望 + 2 包包 + 10 查看全部评分

回复引用

举报返回顶部

cheetah2020

注册会员

Rank: 2

积分: 144
威望: 144
包包: 410

7楼

发表于 2013-4-17 10:13 |只看该作者

GFP的发光“色基”包被在蛋白质结构的中心，好像是排在60几号位置的3个氨基酸，常规的处理方法不会影响它的荧光能力。0 A+ @, X0 P% C+ n) B- A2 S
使用anit－GFP可能与GFP的表达量有关，用免疫荧光的办法能起到放大作用吧（纯猜测)。: x, ?3 |, i+ d7 ?6 G' ^
因为使用普通荧光镜观察GFP还是需要较大的表达量的，尤其是使用多荧光标记的时候，使用共焦镜效果会更好。" u+ E! ~2 E0 |3 F$ J
哦，可能还有一个原因，与其他荧光标记的激发发射光谱分开。