小鼠MSC成脂分化

肉肉77

小鼠MSC分化鉴定实验，成骨、成软骨都能拿到阳性结果，成脂分化时看到了有脂滴出现，但油红O染色就是染不上，不知道什么原因。看文献时，有一篇中他也是挑了几个他认为是MSC的单克隆去培养诱导分化，其中就有几个只成骨、成软骨分化，而不能成脂，成脂这个指标怎么看呢？望MSC培养者们不吝赐教，万分感谢，实在是对这个细胞很无奈。

wf78365421

1取P3代MSC在传代的同时以2×104/cm2的密度接种于24孔板中， 每孔加入15%FBS，1ng/ml bFGF的低糖DMEM培养液0.8ml；
& v2 s0 t$ w: t6 P% l& q2待细胞达80%融合，换为诱导培养液(高糖DMEM, FBS 15%, 胰岛素 10ng/ul)，以后每3～4d换一次液；% ^/ T# E. ]' r
3诱导2周后进行油红O或者苏丹Ⅳ染色鉴定。 ( H# G" _" j5 Z. U( i

肉肉77

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& Q; L1 Z' m' ?( y2 i3 ~' r: f3 c3 j
非常感谢ef78365421的回答。   加bFGF与否会差别很大吗？之前因为细胞因子太贵就没买。我诱导了2次，一次是用的Gibco直接买的分化培养基，一次是用别的实验室配好的诱导液（我们实验室就我一个人养这个细胞且是第一次养，还没买那么多东西配诱导液），是待细胞长到90%多开始加诱导液的，但就是油红O染不上色。 成脂诱导不成功的细胞还有可能算是MSC吗？

肉肉77

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非常感谢ef78365421的回答。   加bFGF与否会差别很大吗？之前因为细胞因子太贵就没买。我诱导了2次，一次是用的Gibco直接买的分化培养基，一次是用别的实验室配好的诱导液（我们实验室就我一个人养这个细胞且是第一次养，还没买那么多东西配诱导液），是待细胞长到90%多开始加诱导液的，但就是油红O染不上色。 成脂诱导不成功的细胞还有可能算是MSC吗？

wf78365421

按理说成脂诱导分化是最容易的了。! J5 {) K7 m9 q2 k) a, Q! B
你的油红O是否有问题？可以换苏丹Ⅳ染色鉴定。

wf78365421

按理说成脂诱导分化是最容易的了。- \; `" k6 w% w( a. R
你的油红O是否有问题？可以换苏丹Ⅳ染色鉴定。

肉肉77

不知道什么情况  我能看到油滴，但就是染不上。之后我又拿了别的实验室油红O，结果还是染不上。但是，那个诱导的细胞我只有一份，所以第二次染我是直接洗掉之前的染料加上别人的。细胞已经放那两天了，我还可以再加苏丹IV染色吗？
( T( n( R) w5 q) }4 J- ]: ]是不是三向分化只要有一项不满足就不能认为这个细胞是MSC？谢谢回复

644414915

回复 肉肉77 的帖子  \( k8 y( M# \* A1 O8 P7 J
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能打听下你是哪里的吗？

644414915

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- c* B) {2 v$ g* ]$ g我有油红，但是没有诱导液；6 e& m4 O% y/ y# _
上次染了下自发分化的还可以，挺鲜艳的

肉肉77

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  |# P4 s2 u9 H$ L
: |. z- H) u8 }+ q. L* R我是广州的。  自发分化？这个是怎么做的呢？
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