小鼠MSC成脂分化

肉肉77

小鼠MSC分化鉴定实验，成骨、成软骨都能拿到阳性结果，成脂分化时看到了有脂滴出现，但油红O染色就是染不上，不知道什么原因。看文献时，有一篇中他也是挑了几个他认为是MSC的单克隆去培养诱导分化，其中就有几个只成骨、成软骨分化，而不能成脂，成脂这个指标怎么看呢？望MSC培养者们不吝赐教，万分感谢，实在是对这个细胞很无奈。

wf78365421

1取P3代MSC在传代的同时以2×104/cm2的密度接种于24孔板中， 每孔加入15%FBS，1ng/ml bFGF的低糖DMEM培养液0.8ml；* j6 }. I2 r1 |6 e8 `
2待细胞达80%融合，换为诱导培养液(高糖DMEM, FBS 15%, 胰岛素 10ng/ul)，以后每3～4d换一次液；
+ Q' u+ e: {& M7 Z' R: I3诱导2周后进行油红O或者苏丹Ⅳ染色鉴定。
: l! M' K* T* h! `

肉肉77

回复 wf78365421 的帖子* \5 ]. E! S( I0 k% @
: z! }  S& W6 M% e! O
非常感谢ef78365421的回答。   加bFGF与否会差别很大吗？之前因为细胞因子太贵就没买。我诱导了2次，一次是用的Gibco直接买的分化培养基，一次是用别的实验室配好的诱导液（我们实验室就我一个人养这个细胞且是第一次养，还没买那么多东西配诱导液），是待细胞长到90%多开始加诱导液的，但就是油红O染不上色。 成脂诱导不成功的细胞还有可能算是MSC吗？

肉肉77

回复 wf78365421 的帖子& r1 f: B+ h) ^, ~" M" {% C

  }# V3 W9 t* w' p% I% |0 f非常感谢ef78365421的回答。   加bFGF与否会差别很大吗？之前因为细胞因子太贵就没买。我诱导了2次，一次是用的Gibco直接买的分化培养基，一次是用别的实验室配好的诱导液（我们实验室就我一个人养这个细胞且是第一次养，还没买那么多东西配诱导液），是待细胞长到90%多开始加诱导液的，但就是油红O染不上色。 成脂诱导不成功的细胞还有可能算是MSC吗？

wf78365421

按理说成脂诱导分化是最容易的了。5 Q# z; v$ J- V# Y, f* S
你的油红O是否有问题？可以换苏丹Ⅳ染色鉴定。

wf78365421

按理说成脂诱导分化是最容易的了。
/ @0 p% V1 M* l+ j, I4 `% C你的油红O是否有问题？可以换苏丹Ⅳ染色鉴定。

肉肉77

不知道什么情况  我能看到油滴，但就是染不上。之后我又拿了别的实验室油红O，结果还是染不上。但是，那个诱导的细胞我只有一份，所以第二次染我是直接洗掉之前的染料加上别人的。细胞已经放那两天了，我还可以再加苏丹IV染色吗？4 T! x3 V! p* V! S8 t
是不是三向分化只要有一项不满足就不能认为这个细胞是MSC？谢谢回复

644414915

回复 肉肉77 的帖子5 W' ^  k4 P9 S
$ o2 m7 G. x6 T9 ~0 f
能打听下你是哪里的吗？

644414915

回复 肉肉77 的帖子
3 F* }( {3 {' h; S$ [! N( x4 L
/ l  k8 U5 y. s* S! H* }我有油红，但是没有诱导液；/ s/ R/ {( C! T  G  l3 l
上次染了下自发分化的还可以，挺鲜艳的

肉肉77

回复 644414915 的帖子
0 m6 {& Z/ K0 R1 L
) |$ Z( \7 I, \/ p0 m( l9 V0 ^3 s我是广州的。  自发分化？这个是怎么做的呢？
6 M, |; |+ _: ?3 ~5 e3 v% L; p