请问干细胞的悬浮培养知怎么做的？

katysong

1. 悬浮法是最早被采用的方法。将ES细胞Dispase消化成小团块或机械法切割（比平时传代稍大一些）后的悬液接种于细菌皿或超低吸附皿中(干细胞培养液不含bFGF)，培养7天左右即可形成EB。缺点：鼠ES细胞自动聚合，每个聚集体里ES细胞的数目不同，人ES克隆集落大小不均，又受消化的影响，所以此法形成的EB大小、形态各异，分化同步性差，分化能力存在差异，且EB之间可能彼此黏附聚集（EB凝集）。
6 D0 G5 P! v- _9 g2. 悬滴法现被广泛应用。调整细胞密度为5*104/ml，将20-30μl ES悬液（每滴约1000个细胞）滴在培养皿盖子上，将皿盖翻转盖在底部含PBS的培养皿上（也可适量加点FBS），因表面张力的作用细胞会聚集在液滴最下方，培养两天后可见ES聚集成EB，随后将EB转移至低黏附皿中进一步培养成熟。缺点：悬滴液体的体积受表面张力限制而局限在50μl以内，且在悬滴形成过程中不利于直接观察EB，操作较繁琐，难以用于大规模培养。

katysong

回复 fwj81 的帖子3 ^* e8 W9 [% a& ?; k4 k

2 ^2 ~9 G3 i+ n) ?2 v隔天换液，每次换液时用2毫升的移液管轻轻吹打几下后收集到一个15毫升离心管中，自然沉降，然后去上清，有新的培养液重悬后接种至培养皿中即可。