支原体污染问题

sandrazz

在feeder上诱导的过程中检测到支原体阳性，但是原代细胞以及feeder细胞到检测无支原体污染，培养feeder的MEF和诱导用的CM培养基都检测了也无污染，请问大家知道什么原因吗？我现在每天换液用primocin杀支原体，不知道能否补救？

oucflora

有可能来源于血清和培养基，因为支原体>0.15μm.如果商家在血清和培养基的生产的过程中没有用孔径更小的滤膜抽滤，很有可能污染支原体。
* ~9 w: I4 V1 Z; G+ r, Q* d8 Y还有可能是实验过程中操作不当，人为的携带到培养体系中。

cbjonathan

可以换用罗氏的BM-CYCLINE试试，我当时连primocin都产生耐药性了

sandrazz

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$ A( u, W7 a1 A1 M- q7 V; H6 t2 i1 F$ f
谢谢，我看陆陆续续出现一些克隆，但是否是真的IPS克隆还不确定，支原体污染后还能诱导成功吗？

小妮子

有小于0.15μm的滤膜吗？如果有，为什么我们在过滤的过程中，不选择孔径更小的滤膜，那样不是洁净程度更高，更安全？

绝对忠橙

估计实验中人为污染原因比较大

cbjonathan

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2 L) p1 o5 @- g5 Z, }3 @
/ c' Z8 ?6 ^/ W; A- E6 \我当时是没成 只要污染了只能形成假克隆 但渐渐分化完了

wolfgang

支原体污染可能来自两个方面，一是你用来包装病毒的工具细胞，爆出来的病毒本身就带有支原体；二是实验过程中操作不当造成污染；支原体轻微的话在4个因子诱导时还是能产生iPS的，但是会大大影响效率并且后期挑克隆培养的效果也不能保证，再一个会使实验成本提高。个人建议一旦发现支原体污染就果断丢弃，防止交叉污染，一旦出现批次之间传递污染将会造成进一步的实验材料和精力的浪费。

wolfgang

补充一点，我曾用invivogen的抗支原体药物Plasmocin控制支原体，但实验中发现对诱导效率有很大影响，且一旦污染支原体加药也不起作用，所以建议做iPS诱导的话应
1 |# p' Y0 r* j) z2 O8 ?7 z8 B事先确保无支原体，并且在诱导中也不要加这些所谓能控制支原体的药

jiaozi

两点建议：血清使用前56度灭活30min比较保险；不确定的细胞与确定没污染的细胞不要放在一个液氮罐