求教：病毒与四因子

yaolinzhang

我做ips已经很长时间了，用的是tet-on慢病毒系统，但还停留于初期阶段。目前遇到两个棘手的问题在此请教：' i5 m2 u/ F6 t( W5 G8 A  X
1.病毒滴度很低，浓缩后只有5次方？" w( f& o( [2 b8 m
2.由于病毒系统本身无GFP且是四个独立的因子，故难以保证OSKM全部转入靶细胞，不知可有较好的方法确保全部转入？6 u# W% h) M. H( g0 J
望高手不吝赐教，诚谢！

goblinwang

我最近也是一直做病毒，我150ML病毒上清液浓缩好了也看不到沉淀，离心条件是25000RPM 90分钟，原先直接用病毒上清侵染293T，滴度也就30%。我感觉滴度低可能与病毒的释放量有关，也就是说病毒制备的体系不是很兼容，我自己的体系是两个不同公司的，其次，我发现不同类型的细胞同一批次的病毒侵染效果也不一样，我用LIN阴性的细胞，流式分选的时候阳性率就只有1%不到，而且荧光显微镜下，基本看不到荧光，但是最后，我们PCR分析了，结果目的基因还是被敲掉了。期待有高手可以给我们更好的解释。
. A# b# w* |: V- k& V你的第二问题，我看的不是很懂，OSKM能否解释下，没接触过。希望能够与你讨论，病毒制作过程中的各种困惑

yaolinzhang

回复 goblinwang 的帖子/ ?1 _+ v6 c' N5 o9 t! |. N: E  [; f
0 W6 M  r2 E2 `: B
谢谢！OSKM是Yamanaka四因子，做ips的。

yaolinzhang

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. D) b, S0 |. V6 B
谢谢！OSKM是Yamanaka四因子，做ips的。

Jonathan

去买那个4 in 1的质粒，那样效率会好很多。

varing

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# j6 P  m6 ]& s" m! ^4 Q+ N' Q& S# ?: |! o) l/ b
5次方。。。加大超离病毒量，用超速离心来浓缩吧。对于是否OSMK都进入同一个细胞的问题，除了使用四个因子串在一起的慢病毒，其他的方法还有提高感染效率（当然就是要病毒滴度够高），保证MEF90%以上感染了。关键就是病毒滴度问题。

yaolinzhang

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) ^  \. ^& m! C( z$ `- p  z
非常感谢！

liuyul03

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" X. v5 f' r* E! k; x+ L6 t
哪里能买到？给个链接吧，谢谢！

huangcong1988

回复 yaolinzhang 的帖子7 S7 }3 a; k* D' u% I

4 H, k, @: I% T2 m, O我也正纠结呢，我是带荧光的载体，包装病毒时候，EGFP表达，而且荧光强度很亮，但是感染靶细胞以后就几乎没有观察到GFP了（感染293T还是很亮的），但是有个有意思的发现是，把感染后的细胞消化接种到6孔板中，过两天荧光强度还行，不知道这个是怎么回事。

huangcong1988

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% o* r8 {! j+ ?8 z+ q* ^
$ K8 V- s5 _1 H3 U还有浓缩以后病毒滴度应该是很高的，浓缩的话，能将病毒浓缩大概15倍，包装的滴度为10的6次方，那么浓缩后就可能是10的8次方了。