G418筛选细胞，为什mRNA水平和蛋白水平不一致呢？很是郁闷

微笑流滢

而且重组质粒上有His 和Myc标签，用这两种抗体检测时，对照里面也有，郁闷郁闷，问问大家有没有这种情况? 求分享，感激不尽，是我原先筛的克隆不彻底吗？需不需要进行二次筛选？
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微笑流滢

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恩恩，条带都在一个位置，用了专门针对外源的引物了，可是还是不行，我上次挑了4个对照和8个过表达克隆，Western检测到几个克隆过表达目的基因，可是用RT-PCR验证了下，和蛋白水平完全不一样

微笑流滢

回复 yangcy-smile 的帖子3 f0 n2 s4 `& ?/ E
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呵呵，是真核表达 用的pcDNA3.1(-)质粒，条带都在一个位置，所以很郁闷啊，按理说应该对照检测不到条带啊，这个先不说，关键是蛋白水平检测到的高表达克隆，他的mRNA水平很低呀呀呀呀呀

微笑流滢

回复 yangcy-smile 的帖子- L' @6 g, q# Z
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呵呵，还是谢谢了

微笑流滢

回复 yangcy-smile 的帖子5 i$ y5 K7 ]9 n; V' O

% K5 w+ Y8 b" b) u2 C/ E我筛完克隆后剩下的细胞还保留着，我是再复苏起来继续筛呢？还是再重新转染呢？有什么好的建议吗？？尽管提呵，洗耳恭听

微笑流滢

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0 ~9 t' A! r  h嗯，老师也建议我这么做，太感谢了