脂肪干细胞提取制备

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; K" u3 F9 h0 ~" w- t胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
% ^4 s8 d& `! k% `" `1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞，用于哺乳动细胞的分离。9 Z: u/ n$ t9 I0 a& s
2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。8 l. o) z! _# D  ]' z6 ?( z
3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。
- U% H. Z) `6 S# W! E4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。: J" _: s- m5 R

! h$ n) r) r9 p* s8 C胶原酶的配置
! Y' \5 I( Q8 ]% c" N胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。0.22um过滤除菌。可用HBSS（如D-hanks或者PBS）或DMEM培养液配制。最好现用现配。也可以配好了零下20度保存，用时解冻即可。1 l! T' l5 i  s& G" Y( J3 Z
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6 i6 Y8 ~5 J: _5 u脂肪干细胞胶原酶是I型 质量浓度0.1%，37度消化30min-1h,7 J" I' V+ {% U9 {+ z5 I

" Y4 g4 [  E% ]3 X3 a# B# v- F
9 z7 c8 V" O' N) ?: kRoche 的胶原酶 P 是用于胰岛分离的，相当于 SIGMA 的 V 型，

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8 S) m: t5 T6 j+ _3 W4 z5 U- |90分钟时间太长了。对细胞活率有影响。