脂肪干细胞提取制备

zhangjieyctc

1.脂肪干细胞提取所用的胶原酶是几型的？浓度是多少？消化时间？
# k9 g+ W" f3 m% g4 _) u2.Collagenase P 是几型胶原酶？

wf78365421

4 b: O. M$ k7 K- y, s
胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。6 v0 K0 I; J0 w6 m
1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞，用于哺乳动细胞的分离。% s2 |. y. j2 [
2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。
# g7 r2 G. O! i- }8 v5 Q6 _2 V3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。1 d& b( f  g3 l
4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。
6 N( c) d& d) F+ `- i3 B8 z
' ]/ c, ]; |; z) D, Q5 a胶原酶的配置7 F& D0 N  r. C7 n% N  |$ y
胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。0.22um过滤除菌。可用HBSS（如D-hanks或者PBS）或DMEM培养液配制。最好现用现配。也可以配好了零下20度保存，用时解冻即可。
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8 V0 x4 {* L+ e: H/ H
: d- l& P" @' C* M# s脂肪干细胞胶原酶是I型 质量浓度0.1%，37度消化30min-1h,- O" P# j9 S* B% U) ^7 r
/ U" Q9 D, |# F3 J, p  b2 F7 ^2 P
: G: N8 m& {6 o% V
Roche 的胶原酶 P 是用于胰岛分离的，相当于 SIGMA 的 V 型，

deshenglll

你上网上找啊。群里就有

倔强的投手

用P也是可以的，我刚开始的时候就是用P，也能提取出细胞
( F3 u4 T7 k, ?3 ~: A' U: `$ n4 U' g胶原酶的浓度是0.1%+1%BSA，我一般消化90min

wf78365421

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7 ], e0 o" J5 C  q
/ ~6 K! ~( ~( T1 q+ }3 ^90分钟时间太长了。对细胞活率有影响。

zfgxb

0.1%的I型胶原酶加上0.25%的胰酶，比例1：1，37°C消化时间30分钟足够了,过度消化对干细胞有影响