脂肪干细胞提取制备

zhangjieyctc

1.脂肪干细胞提取所用的胶原酶是几型的？浓度是多少？消化时间？
! y* _8 t7 N5 ?" g0 H2.Collagenase P 是几型胶原酶？

wf78365421

2 C. }; j! b+ q! o3 m7 Y+ A8 ?胶原酶（collagenase）是从溶组织梭状细胞芽孢杆菌提取制备的，主要水解结缔组织中胶原蛋白成分。当拟消化的组织较硬，内含较多结缔组织或胶原成分时，用胰蛋白酶解离细胞的效果较差，这时可采用胶原酶解离细胞法。 胶原酶仅对细胞间质有消化作用而对上皮细胞影响不大。因此适于消化分离纤维性组织、上皮及癌组织，可使上皮细胞与胶原成分分离而不受损害。常用剂量为最终浓度200U/ml（约为1mg/mL）或0.03%~0.3%。胶原酶分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型以及肝细胞专用胶原酶，要根据所要分离消化的组织类型选择胶原酶类型。
* w4 Y3 N% X6 x9 s$ r) G1、胶原酶Ⅰ用于上皮、肺，脂肪和肾上腺组织细胞的分离。用于消化组织中连接部分使其成为单个细 胞，用于哺乳动细胞的分离。& M- w! K# u6 |8 j3 X' }5 e$ [
2、胶原酶Ⅳ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它能消化多种组织。' V8 P' m0 H2 L  L* H0 S
3、胶原酶Ⅴ包含至少7种蛋白酶成分，分子量从68-130KD不等。它可用于胰腺小岛组织的分离，将结缔组织分离成单个细胞。& B; T2 a0 N# n) x
4、胶原酶Ⅱ适用于肝脏，骨，甲状腺，心脏和唾液腺组织。5 g/ b$ y& n. y5 E( a

% i" M. J- J. V4 E& A' X; ^9 T胶原酶的配置
1 U& |; A2 B2 ~/ _7 j( @胶原酶溶液同胰蛋白酶一样配制、消毒灭菌和储藏。0.22um过滤除菌。可用HBSS（如D-hanks或者PBS）或DMEM培养液配制。最好现用现配。也可以配好了零下20度保存，用时解冻即可。4 @& `" f/ N  y2 p. c% w7 w- w

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3 f: u) F8 A  D9 f6 i9 q+ U! P1 p脂肪干细胞胶原酶是I型 质量浓度0.1%，37度消化30min-1h,
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3 a* u) B4 k: Q$ E- l( `1 I/ cRoche 的胶原酶 P 是用于胰岛分离的，相当于 SIGMA 的 V 型，

deshenglll

你上网上找啊。群里就有

倔强的投手

用P也是可以的，我刚开始的时候就是用P，也能提取出细胞: x+ j6 M9 f' `- X, }
胶原酶的浓度是0.1%+1%BSA，我一般消化90min

wf78365421

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6 T* E2 y! h5 B# Z; o
: b; E. x% S# O6 j3 x$ F+ [90分钟时间太长了。对细胞活率有影响。

zfgxb

0.1%的I型胶原酶加上0.25%的胰酶，比例1：1，37°C消化时间30分钟足够了,过度消化对干细胞有影响