关于EB的形成与克隆的挑取

nichifanlema2

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要是人的ES或者iPS的话，消化后吹打成比传代克隆稍大的克隆，收集到离心管，静置一段时间除去上清后，加无bFGF的培养基重悬，转移到国产的细胞培养皿悬浮培养4-6天即可。

nichifanlema2

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EDTA消化后的克隆非常小，甚至都会成为单细胞，这样细胞会非常容易死掉。另外，EB体外形成一般用悬浮培养，用96孔板稍麻烦一些，即使没有包被，也会贴壁，只是贴的很不牢，慢慢都死掉了。小克隆或者单细胞的悬液，悬浮培养做EB时，可以尝试加Y，或者商业化的EB形成培养基，价格没那么贵，效果会好很多。

nichifanlema2

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8 U/ m$ R' H5 h悬滴法产量太少，也不太适合人的多能干细胞，基本都会死掉，自然也不会形成EB。Y是指的Y27632,。小细胞团块形成的EB会大小不一，但是不影响后续实验，形状是典型的EB形状。