请教：小鼠iPS传代方法和分离方法

damaoshu

向各位请教：" e9 b) T) E; F; v& g1 r
1 小鼠iPS传代方法有哪些？
% h2 g* m3 s, o/ e% M% H& w3 T. s我所知道的是在饲养层细胞细胞上进行的-首先挑取colony，然后用胰酶消化，终止，离心重悬然后再接种于饲养层上。还有其他的方法？如不用饲养层或者用胶原酶消化（再用胰酶）消化的吗？
( U! p6 N/ _8 P% ^4 u2 小鼠iPS分离方法：
9 B) S0 {" {; g$ i5 Q: u我知道网上有用差速帖壁来分离iPS和饲养层细胞的。还有其他的什么方法吗？3 S$ F  R7 g5 z) o) L8 E, G( p

  }6 A  F; B  z  J1 F# ~3 _最后有一个问题，用差速帖壁得到的细胞能用来做western和免疫染色吗？
) i3 O& K2 F, w$ X) q3 }3 {谢谢各位。

chunlanchen

回复 damaoshu 的帖子
7 @8 P# T. b0 \' a/ b  S" n8 B% z; e- v3 z  p# s
也可以的，小鼠ips比人的ips容易养，但是我养鼠ips一般都在feeder上，无feeder培养的ips总觉得状态没有那么好。

damaoshu

回复 chunlanchen 的帖子* {) }% t; r2 x, S9 O
; V+ V) ?8 X4 ~9 b  G$ J+ {
谢谢你。我知道人的iPS有三种经典方法：feeder dependent, feeder independent and conditinal medium. 我不知道在小鼠也是这样吗？

chunlanchen

IPS传代方法：除了第一次挑取克隆，其他时候传代和普通方法一样用胰酶消化，这方法不会有什么问题，除非到了后面细胞有分化，就再挑取单个克隆再传。如果不用饲养层，就要使用不同的培养基。
, }( s/ W% J6 M2 w, H- yIPS分离：我们用的都是差速贴壁，这样分离的细胞可以做western和免疫染色