请教：小鼠iPS传代方法和分离方法

damaoshu

向各位请教：! X% J" R; ^- {0 e5 d, ]: `. @
1 小鼠iPS传代方法有哪些？, m8 y/ I2 Y! p8 S* z; i" H
我所知道的是在饲养层细胞细胞上进行的-首先挑取colony，然后用胰酶消化，终止，离心重悬然后再接种于饲养层上。还有其他的方法？如不用饲养层或者用胶原酶消化（再用胰酶）消化的吗？* }$ [( v* }, Z/ P3 I# Y# J
2 小鼠iPS分离方法：
3 L$ d  Y- V! k$ h我知道网上有用差速帖壁来分离iPS和饲养层细胞的。还有其他的什么方法吗？$ C" b5 i% J4 c/ j
& w3 x4 ?+ S4 x) S$ ~% |& ~+ n
最后有一个问题，用差速帖壁得到的细胞能用来做western和免疫染色吗？% M9 h; n. {9 y0 T6 j+ }
谢谢各位。

chunlanchen

IPS传代方法：除了第一次挑取克隆，其他时候传代和普通方法一样用胰酶消化，这方法不会有什么问题，除非到了后面细胞有分化，就再挑取单个克隆再传。如果不用饲养层，就要使用不同的培养基。
+ J8 E5 P; L  C+ DIPS分离：我们用的都是差速贴壁，这样分离的细胞可以做western和免疫染色

damaoshu

回复 chunlanchen 的帖子7 T/ p4 l7 s+ J" Y6 k5 H# h

, x; Q9 Y% P) j3 o# H谢谢你。我知道人的iPS有三种经典方法：feeder dependent, feeder independent and conditinal medium. 我不知道在小鼠也是这样吗？

chunlanchen

回复 damaoshu 的帖子
3 {  m( s3 t& y% M/ t- S# \. H) l) |- `3 `. D9 n$ c: j* z
也可以的，小鼠ips比人的ips容易养，但是我养鼠ips一般都在feeder上，无feeder培养的ips总觉得状态没有那么好。