CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊! l+ x3 C" {& N7 {' O3 N* S- \
我找的文献说得都不具体
8 z% f" H) A) d) D7 k# i有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。, j6 N% p- H% w7 e8 H' u
另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/
6 D: o0 c/ S: t3 A8 i9 X直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了
- Y) P& i* U1 Hexon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site : o2 n- d" p2 t- p3 h7 u
再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

回复 chips100 的帖子, e* |* m! Y; p* ?! f4 \/ T3 i

$ d7 r. ?7 Q: O! |9 D我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

回复 quanri1126 的帖子
6 w7 e. v+ L2 H
+ l* h) U: o. a  o求详细构建之过程

milanello11

回复一下

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子
4 a0 _2 Y- l0 n+ A/ F7 Q) Y7 a9 S  y* e( `7 v5 K# K+ E
我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子0 W/ t  Z8 S# S; g5 c2 W1 T, A

1 i* v+ Q* Y0 Z$ m* W: ]你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！