[请教] CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

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发表于 2013-6-16 15:06 |显示全部帖子

26包包

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊 \6 K8 `' P+ v' c" |: E4 f
我找的文献说得都不具体4 {* s* t* `4 ^
有没有详细一点的步骤？

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chips100

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优秀会员金话筒

发表于 2013-6-17 09:58 |显示全部帖子

参见addgene，说的还算详细。
另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

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chips100

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优秀会员金话筒

发表于 2013-6-17 10:01 |显示全部帖子

http://www.addgene.org/CRISPR/
直接给链接，貌似zhang的比较好

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quanri1126

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发表于 2013-6-18 12:22 |显示全部帖子

根据zhang的site http://crispr.genome-engineering.org/ 选就行了
exon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG 中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target 最后的NGG是PAM site 2 q$ i3 n( d1 }. D+ e
再有根据不同的plasmid 可能长度不同我买的zhang的plasmid 刚开始做有问题一起讨论吧

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chips100

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优秀会员金话筒

发表于 2013-6-18 13:26 |显示全部帖子

quanri1126：求惠赠质粒

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quanri1126

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发表于 2013-6-19 15:37 |显示全部帖子

回复 chips100 的帖子% W g# S: t5 j4 U* X' {$ f$ |7 J
6 n8 Q8 N0 a4 L! F
我不在中国，而且从addgene 买也很便宜运费加上质粒不到1000块钱

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cywjswsky

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发表于 2014-5-16 09:07 |显示全部帖子

回复 quanri1126 的帖子9 b( ]& Q1 i: E: z2 `& N
$ C$ v5 {9 [# }, W
求详细构建之过程

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milanello11

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发表于 2014-6-11 14:39 |显示全部帖子

回复一下

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小桥流水

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发表于 2015-7-8 21:34 |显示全部帖子

回复 quanri1126 的帖子% ^+ r) Q0 I l) v) R( f# }2 O" [

我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

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小桥流水

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发表于 2015-7-8 21:39 |显示全部帖子

回复 quanri1126 的帖子; ~' z$ u u% U$ D9 O8 W
7 s4 I1 C: C; f5 X2 t
你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！

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