CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊8 v0 G8 F8 N, W7 `/ _; ]" d: v
我找的文献说得都不具体
. I9 Y( K& q$ W. n有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。
* g/ m+ [# J6 V: b另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/
; s9 Y2 F/ i' i. [% |; G直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了
3 D6 p% i, Y: H. ]+ z, xexon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site
4 @6 K4 b; g* V4 S/ b: U再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

回复 chips100 的帖子% N, ~! r8 Q& ^8 w/ L9 A
6 ^. Z  O; g0 ^/ ]! K; ~/ S, A
我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

回复 quanri1126 的帖子
# K2 ]+ ^9 U3 @0 h3 e/ j* D
- _5 k5 N5 N( L* ], T求详细构建之过程

milanello11

回复一下

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子4 r" {% e- E1 O' M, K+ \

: o+ @# p, l) E7 H我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子
8 I( ~$ s2 J7 a" |* w/ k  u; D8 w, v% d8 J, G( ?2 c! g5 c9 u6 I
你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！