CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊! \% j6 |& ^7 k% |6 [# K4 c' Q
我找的文献说得都不具体
  L* }6 m/ m$ d+ F5 p" T" r有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。
" ^' Y' G% {/ F5 T& c0 y- ~; X0 X另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/$ W$ x7 C: M+ U. s1 {
直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了. ?$ R' i! a' T/ I
exon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site
/ G2 {7 p6 V* c5 H再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

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2 r, ^' E( m% \/ i: |, ~
# _  Q3 u  W1 o& A3 N9 q我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

回复 quanri1126 的帖子0 R4 q. Z, r/ _( D. R8 u$ u1 h5 |/ G

3 Z; d( ~' Z- D求详细构建之过程

milanello11

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小桥流水

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" M1 d  b( s/ m! h2 F7 [
+ o0 V& U  R$ r4 O  d我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

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# L1 T; P3 d7 W9 X# L
) |1 ?# U4 b: C) e8 I你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！