CRISPR/cas9系统中gRNA的设计

runsong

CRISPR/cas9系统中gRNA怎么设计啊% f4 Z) r3 |8 I& d1 _) f; b
我找的文献说得都不具体) W  c) H0 [- n! {$ y/ l, F
有没有详细一点的步骤？

chips100

参见addgene，说的还算详细。7 Z7 L; h0 Y) d/ R" Q
另，能惠赠 CRISPR/cas9系统质粒吗

chips100

http://www.addgene.org/CRISPR/' D3 g0 O: W+ [  q; U4 r5 V
直接给链接，貌似zhang的比较好

quanri1126

根据zhang的site    http://crispr.genome-engineering.org/  选就行了
& m+ M5 N9 E1 M& T& \3 H. }3 |exon上的位置 GNNNNNNNNNNNNNNNNNNN NGG  中间20个随机碱基 G+19个N 可以选作一个target  最后的NGG是PAM site
- b" q8 n5 E0 S5 j4 W, N再有根据不同的plasmid 可能长度不同 我买的zhang的plasmid 刚开始做 有问题一起讨论吧

chips100

quanri1126：求惠赠质粒

quanri1126

回复 chips100 的帖子9 F. b9 s( x; w$ i6 Z: l

+ F4 D3 a' R  |' A0 D1 p5 X我不在中国，而且从addgene 买也很便宜 运费加上质粒不到1000块钱

cywjswsky

回复 quanri1126 的帖子1 G3 a8 s1 T: K' C$ w( A$ y/ S- i' ^- f
  s+ N1 K  L8 T' u7 Y" L1 z
求详细构建之过程

milanello11

回复一下

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子* L' Q; J2 g, F" M* l$ Q! I- Q
! j5 M, p, B- U2 M+ g2 W
我想问一下，为什么中间是19个碱基呢，如果21个会怎样

小桥流水

回复 quanri1126 的帖子! e1 J1 F3 ^8 Q1 W+ j
& B! j' X2 n3 R2 E& e& D! Z
你好，我想请教一下，在cas9中，设计gRNA引物时,用T7启动子，为什么要求靶标序列满足GGN19GG的条件，，还有为什么中间一定要求是19个碱基，如果不是19个会怎样，，还有如果我的基因里面找不到满足这样条件的序列，那该怎么办呢，跪谢，赐教！谢谢！