关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子
5 b5 u) i0 u* U2 i: b- S; J) q/ ], c1 q6 F6 ~2 A6 ?
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？* V" F$ f5 z% U
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？# z, c& n4 m2 m
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？' ~- \1 V4 j8 o4 ~
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子
8 W4 G" Q0 f; M5 F) Y, C7 h/ w0 s/ W6 I% b, i) l
1、这张照片是培养几天的？! D, Z+ o9 O: E. X, K
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？& q, u1 n/ ]) X; B( u
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
4 o4 F2 c; R/ [- V! p: L% Z3 Q4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）6 ^2 Z) @, s; w/ u
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子
+ y" m* C1 ^7 }2 U$ O/ K3 |5 Y7 A( X# V
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；0 w  o! P/ v6 \  g+ `
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~. A: L! N1 P9 q, F  d
3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清* R6 D. q# q. a! {  t- K
4：长满50ml培养瓶花了18天。
8 t9 `- t, ]5 V5 L$ Q7 K( r谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子& w# ~1 j7 |% a+ J9 Y
' Y7 z) q) U  \
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
3 A  n4 a/ k2 N! e3 T4 _" U3 n2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
+ G; R  y, g; u0 e3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
) e5 Q0 @$ G0 m+ D' ~4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子2 Y6 h) V3 @, _+ p  y6 Y
: f$ Y+ \6 v. _
谢谢~