关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子3 |7 F3 X9 p8 V; G, `6 q  a9 y, ^. X# j
5 ]* M+ R7 o- h: ?) L
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
0 ~; F' c8 N# _" m' w# b! R临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？! p+ _9 p" p* W% [: M' f0 c
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？+ N$ L  f' n) j9 ^
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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5 Z0 g% ^8 F$ V! P$ Y; }6 D8 P; z& D7 Z
1、这张照片是培养几天的？
/ Q1 I7 ]& X( g/ [5 K2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？' ?; |% N$ z& y$ X
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
3 A$ G$ ~3 M; j1 _4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）
, Q' U4 ^& k' S, V了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子, E! M# L( r9 e1 q- W
# Q+ d8 q' c+ \3 p9 H. d& I
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；" P3 ?6 ~* U$ z; j8 K8 @
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~1 R/ u; b- N: o) ^$ V' g1 Q9 X2 Z
3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
- x7 f3 |5 u9 c' [6 i' G# O& [4：长满50ml培养瓶花了18天。1 O5 l& b( q7 n' |7 C
谢谢~

liaoyanstudy

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" |: |; }; B: z
# p  w2 G% v: E; N1 q6 j, I1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
) d9 \& R7 k! X- R  i/ @( v2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清4 U: V9 E8 i$ U% K( y  P$ h
3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
& K- {) ^" P  m- [/ @3 \  E- z' j: Y4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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( a* @4 }; U, q9 p6 \  U* m. b! }$ c3 R5 l8 ^" W- c8 T1 |
谢谢~