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朗日生物希瑞干细胞
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关于间充质干细胞实验技术问题~    

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发表于 2013-6-17 19:58 |显示全部帖子
大家好,最近我养了一些临床来源的MSC,然后发现老化的比较严重,这个才是第一代,就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的?目前我分析2个原因:1:我在消化的过程中,酶的量比较多,50ml的培养瓶,我一般用了5~6滴的酶消化。2:是不是我种原代的时候,细胞比较少,然后我用的培养瓶比较大,然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间,从而导致老化或者分化。最后我想问下,有没有什么方法可以阻止这种情况发生》?谢谢~~
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发表于 2013-6-17 20:03 |显示全部帖子
这个是图片
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发表于 2013-6-17 20:03 |显示全部帖子
希瑞干细胞
这个是稍微低倍的图片
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发表于 2013-6-17 20:04 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

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金话筒 优秀会员

发表于 2013-6-17 22:36 |显示全部帖子
回复 liaoyanstudy 的帖子
! ^, }" M, N: _2 A3 N& z! v0 d% f1 R9 v! E! }  K0 c5 U
你讲的不够详细,你用的什么培养基?血清是哪一种,厂家。。。?
& G5 U3 a9 G& a& D! M临床来源,是正常人还是病人,什么组织?怎么取材的,消化时间多长。。。?' l' R2 R6 n3 D. z$ Y% t
培养了多长时间长成这样,有没有先前培养时间短的自身对照,你总共多少样本,一些是多少?
# V; @8 u$ Z& ?' \7 h) `0 k& v越详细了,别人看了才更明白,才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。
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发表于 2013-6-17 22:52 |显示全部帖子
回复 liaoyanstudy 的帖子
# u( `1 K6 p1 a$ y. e& t) ]% H! k' R, W0 p/ t# |: m5 n
1、这张照片是培养几天的?
$ m- _" }5 w. A8 W  {, E! `" d2、消化用的什么酶?浓度是多少?5-6滴酶是多少ml?
# O; |$ [% |1 X3、培养液是什么品牌?是无血清培养基还是用的XX血清?, L* G, s; J2 [! y1 y' z. y6 E
4、长满50ml培养瓶的具体时间?(很长是几天?); i1 {+ Z; \3 u9 a
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢!
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发表于 2013-6-18 10:49 |显示全部帖子
主要看你酶的浓度,消化时间,培养天数,种植密度等等去考虑。
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发表于 2013-6-18 12:27 |显示全部帖子
回复 yinfuhua 的帖子" U( x! d8 t) [
9 r3 ~% n8 C" H% a" ?. P5 c
1:这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片;$ A1 `0 j" G1 T, T1 b
2:消化用的是常用的胰酶,浓度应该是0.25%,5~6滴大概0.5ml吧~/ L0 U" @  _' P7 |, R) \
3:培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
1 W3 ]# Q  `- L1 R) W7 m, j8 d4:长满50ml培养瓶花了18天。
6 q" g2 A) k) N6 i& ?谢谢~
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发表于 2013-6-18 12:30 |显示全部帖子
回复 fengxiwu 的帖子
! q% ^7 n, I$ D  [) A
% d" g4 n: n1 E  ]" @4 ]1:临床来源白血病患者,但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化;
! d+ Y  r$ q; n$ C/ g2:培养基用的是DMEMF12,含有10%进口胎牛血清
* D* |" V9 S0 f- u+ y- Y3:这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片,也就是说一共养了20天的照片,传第一代后的第二天
3 d; A" a3 f7 ?) m# f. I4:之前师姐养的是正常人的,她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。
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发表于 2013-6-18 12:30 |显示全部帖子
回复 fengxiwu 的帖子, w$ ~* N, \7 G7 ]& y( g7 v

* N7 r  y  R( c  T0 [6 ]% A谢谢~
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