关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

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9 Y* A. Y4 k2 R( `! Q6 H* h7 t% F
2 p( K) W# i, u你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？
; F% K5 V; s2 z临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？% Z9 w' l) P$ Y! z- F
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？% R5 X; z/ c7 ?9 q, e. t
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

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3 P: h# V; v" @" z) u* V4 i) R% r. Q4 F* r$ r& G1 U0 b
1、这张照片是培养几天的？9 M6 u" `( C- B: B6 m/ \
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？3 C# T! N0 K, e/ A( V' `+ ]1 O0 t' @
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
5 n: l$ A- u2 o. `; ?1 M4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）2 k# ~& C9 o* w
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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3 q+ ^+ P% D1 w
4 ?8 A; S# ^# {* z* ~1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；: v  a8 |) m5 C
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
- v7 t& R. W* Y  a7 v: T" m3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清0 _' c6 o2 \6 ^- v( r/ S+ l
4：长满50ml培养瓶花了18天。
, z. l4 M* p# [2 j: \: y谢谢~

liaoyanstudy

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+ ]1 M+ I6 V1 r. Z8 X  U  X! x2 N% n- l9 B" I- |
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；! z9 ^4 k/ q" }7 S  N3 \0 T
2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
( A( Q4 n) L& c8 ~  B+ x3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
9 `. V) R' ^& D4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子% x' o! u  y& E7 M! f! m: f* T; s  s

7 t  d+ U" P7 t6 v谢谢~