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朗日生物希瑞干细胞
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关于间充质干细胞实验技术问题~    

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发表于 2013-6-17 19:58 |显示全部帖子
大家好,最近我养了一些临床来源的MSC,然后发现老化的比较严重,这个才是第一代,就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的?目前我分析2个原因:1:我在消化的过程中,酶的量比较多,50ml的培养瓶,我一般用了5~6滴的酶消化。2:是不是我种原代的时候,细胞比较少,然后我用的培养瓶比较大,然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间,从而导致老化或者分化。最后我想问下,有没有什么方法可以阻止这种情况发生》?谢谢~~
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发表于 2013-6-17 20:03 |显示全部帖子
这个是图片
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发表于 2013-6-17 20:03 |显示全部帖子
希瑞干细胞
这个是稍微低倍的图片
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发表于 2013-6-17 20:04 |显示全部帖子
干细胞之家微信公众号
希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

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金话筒 优秀会员

发表于 2013-6-17 22:36 |显示全部帖子
回复 liaoyanstudy 的帖子
% y! l% ~- T- D- u8 G0 ^/ _+ O+ H; d- Z3 _4 s; Q5 T/ o5 ^# E. A
你讲的不够详细,你用的什么培养基?血清是哪一种,厂家。。。?
( \  z% Q* ]# ]临床来源,是正常人还是病人,什么组织?怎么取材的,消化时间多长。。。?: \: S" V( J4 B& D0 U
培养了多长时间长成这样,有没有先前培养时间短的自身对照,你总共多少样本,一些是多少?
, M  |$ t1 a- R, q/ h& w  h越详细了,别人看了才更明白,才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。
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发表于 2013-6-17 22:52 |显示全部帖子
回复 liaoyanstudy 的帖子
( K5 }- r8 n; ~! d" P+ B% e4 A5 N3 |- U9 v. a0 m
1、这张照片是培养几天的?+ x8 w) i  w3 `: E7 m: ^* Q
2、消化用的什么酶?浓度是多少?5-6滴酶是多少ml?
. t0 }5 D* R/ V  |7 _. a3、培养液是什么品牌?是无血清培养基还是用的XX血清?
! j; K9 P4 U. \* s# k5 D, M, c4、长满50ml培养瓶的具体时间?(很长是几天?)
  X, u! V, p" |, \7 T( E  \/ _9 a了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢!
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发表于 2013-6-18 10:49 |显示全部帖子
主要看你酶的浓度,消化时间,培养天数,种植密度等等去考虑。
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发表于 2013-6-18 12:27 |显示全部帖子
回复 yinfuhua 的帖子
0 ]; Q$ C2 Y* R: e6 l, v, Y; e) J( G9 m' [+ o( N$ y! _
1:这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片;
! `: M; K1 D. z" Z0 x3 j3 a$ _2:消化用的是常用的胰酶,浓度应该是0.25%,5~6滴大概0.5ml吧~- J4 p# K# l4 x: ~$ S  I
3:培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清
1 ]) U0 A" \. d& G) C# C/ V4:长满50ml培养瓶花了18天。( B% Q4 {" K  L1 ]: @
谢谢~
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发表于 2013-6-18 12:30 |显示全部帖子
回复 fengxiwu 的帖子
: Y# X4 l. U8 Y& T5 \/ y: e8 f
' G( v! O8 h% [& }5 T5 x1:临床来源白血病患者,但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化;
5 c( a- h2 i* ~  b& Q8 ?- Z2:培养基用的是DMEMF12,含有10%进口胎牛血清
; S) r: z" B  g4 l- _  j0 N3:这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片,也就是说一共养了20天的照片,传第一代后的第二天
; D- U0 C+ f! N, |* |5 z; M) c4:之前师姐养的是正常人的,她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。
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回复 fengxiwu 的帖子  p% t; c8 V' B' u+ |* \; e

" E% X1 A' @  N$ F谢谢~
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