关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子* h4 F# m' [0 P; ]' a; r& F9 r
/ S# g1 `  m, {- Z9 W* f. B/ a
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？5 d, C! g$ K2 C7 f+ M; ~
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？1 g5 o' s" B2 B* V: P3 @% \6 L
培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？: q6 F+ D) g, W$ L1 |
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子7 v$ n, u& E& l4 {9 s# S
) V2 O& _5 m1 x8 H* {" U4 x
1、这张照片是培养几天的？
$ q* o$ X# r$ u. Z  L! t. z& G2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？! P3 e: m1 B, }, _
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
% f: b( l/ e3 c3 h* F4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）& _5 V6 Y* [  l( ?  q. K) L, V
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子
; O2 Q  m( v! e& R
# ^- a/ D5 c  }1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；: @; N( m2 r8 O9 Z. ?* k
2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
( o, a* z; \8 f9 K3 A7 @3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清1 g7 l% n4 q$ B0 N
4：长满50ml培养瓶花了18天。
  R' |! X6 A  ?$ ?) t谢谢~

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子
8 F( G. c$ ^+ Y6 i% c# P$ _  p, S. @
1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
9 w7 g4 g1 P, G( |2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
1 A3 o/ R# s+ x% M: y  G, a3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
6 F, e) ^- W* N4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子. n/ j/ {  M* U3 }" B( E
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谢谢~