关于间充质干细胞实验技术问题~

lele

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/ e" K1 d+ ?  U+ }$ k
培养基没有问题；
5 X* o  `* t0 k. E9 J原代培养18天细胞铺满，时间也不算太长；- J- `+ d3 o, L6 f  l$ G2 t8 p7 H
有几个问题问一下：$ n6 d# h0 n/ s- P2 n" C2 _
1. 胰酶消化时间有多长，镜下观察细胞在什么状态下终止消化的呢？（比如说百分之多少细胞变圆或漂浮起来）？
4 M: `' C6 [2 C0 t) c1 x8 g2. 患者性别和年龄是多少；$ l+ U7 r9 S2 L8 Z( E) F/ q; B
3. 传代细胞的比例或接种密度是多少？
+ c. m# L/ _& p( g6 z" f' R4. 原代细胞的接种密度是多少？什么方法获取的MSC？
4 t( [, b' ~1 T& _# F

deshenglll

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; T. s/ n: E9 R' z7 B9 v% |8 ~. d2 X! G9 @( z. r/ ^0 r- C
你提问的方式不是太清楚啊。你这厡代培养了几天？传代时细胞接种密度多少？还有就是胰酶浓度及消化时间是多少？这也是为了我们能给你更好的解决问题。

星火燎原3562

我的细胞也是这样，用的是DMEM培养基+TBD血清，血清没有你的好，很是纠结，准备换hyclone血清，不知道你用的是什么血清

wind789

& Q) G( y4 v' m# C
0 F" q) z  f2 c
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, M$ \( I* Y) @* u, Z( g) d- t9 j& ?7 w& r. Q5 F) e
是骨髓MSC？第一代长满的照片有不？

bonny

回复 liaoyanstudy 的帖子2 g, ?  S0 _. j0 {$ y" a3 U

* [( d6 X- ?# e原代先用小的来养吧，可能本身取材的量就少，细胞太少本身就影响增值。主要是消化的时间，量没有问题。原代长到50%-60%就可以传了，有些人喜欢80%，不过原代我喜欢不那么满。长满会有接触老化的问题

liaoyanstudy

回复 bonny 的帖子8 Q1 I8 _" r+ ~* z
  g4 M5 a. F8 }% z- {' N
恩~不过很多文献都是说长满80%才传代。那接触老化的问题是不是真的存在？？~

spring1221

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/ F& E7 U  v- P' w
. ~& \% `" I# @# @# h% E5 @$ [想问一下楼主，原代长到18天的时候状态怎么样呢。胰酶消化是个经验问题，注意结合镜下观察就好了。我觉得主要问题在于，原代的换液时间，一般情况下，营养不足是细胞老化的直接原因，当然你原代密度太小会影响。老化是不能逆转的了，做个检测看看表达情况来确定能不能用吧

tonyww723

酶的问题不大，不过时间不宜过久，如果是组织的话 不要超过30分钟到1个小时，孵箱内，需要加血清终止反应。
! ?* e# c+ f$ l( P不过看你的这个图，估计接种密度太低了，原代细胞如果量不大的话，最好放在培养皿养，标准的作法是看到克隆后，用tips挑出来，然后放在孔板里养，正常传代密度不要低于3000/CM2

liaoyanstudy

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1 w: }+ `' h, r! k
你好，目前干细胞遇到些问题想咨询你，这样的，由于实验室问题，更换了另外一个实验室人，然后新的培养箱CO2变化特别快，干细胞在传代之前，长得还算正常，但是我一传代，就不行了，老化特别严重，酶的问题我已经排除了，想问下C02对干细胞老化是不是有促进作用??谢谢~

liaoyanstudy

回复 spring1221 的帖子1 t' H5 K' x+ Z) Q% x

$ V) D" _" Q& R7 D恩~好的~我再看看~谢谢~