关于间充质干细胞实验技术问题~

lele

回复 liaoyanstudy 的帖子5 k7 Z9 K1 e8 o. c7 o* I

7 b, h7 ?. B9 d7 X% ]培养基没有问题；' v5 K& c3 E9 |
原代培养18天细胞铺满，时间也不算太长；& R# I' F6 u  t) B8 Q% R2 o/ y
有几个问题问一下：
) \" W7 @- g/ _9 b1 P7 A1. 胰酶消化时间有多长，镜下观察细胞在什么状态下终止消化的呢？（比如说百分之多少细胞变圆或漂浮起来）？, A$ L* B! K# Z: B& f8 I
2. 患者性别和年龄是多少；
8 C- U6 [; J/ f7 @( H3 s  q4 Y; Z3. 传代细胞的比例或接种密度是多少？6 x) h( r" Q& V+ G. `. s/ G# v
4. 原代细胞的接种密度是多少？什么方法获取的MSC？
" C9 F/ c, J7 N! K" ?+ T& y

deshenglll

回复 liaoyanstudy 的帖子" k+ F. T4 U- f9 B
7 G! t0 h7 b" e" V& s7 |: h
你提问的方式不是太清楚啊。你这厡代培养了几天？传代时细胞接种密度多少？还有就是胰酶浓度及消化时间是多少？这也是为了我们能给你更好的解决问题。

星火燎原3562

我的细胞也是这样，用的是DMEM培养基+TBD血清，血清没有你的好，很是纠结，准备换hyclone血清，不知道你用的是什么血清

wind789

/ G+ g4 k6 k6 g% ~- ]# k" Y

4 `; U. m) X$ w2 ]+ E7 R回复 liaoyanstudy 的帖子
: O! g" M2 T- {( v% {5 s+ l2 H1 [) _6 H9 z6 f  D2 w& T/ p! d& v
是骨髓MSC？第一代长满的照片有不？

bonny

回复 liaoyanstudy 的帖子8 J4 n. P* r& D/ r0 k

, R) D+ o' S3 ~) O; g( Q4 v原代先用小的来养吧，可能本身取材的量就少，细胞太少本身就影响增值。主要是消化的时间，量没有问题。原代长到50%-60%就可以传了，有些人喜欢80%，不过原代我喜欢不那么满。长满会有接触老化的问题

liaoyanstudy

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6 v9 ?; a  J6 L+ q% ]3 W+ a9 j# D1 s$ @  ?) Q7 P
恩~不过很多文献都是说长满80%才传代。那接触老化的问题是不是真的存在？？~

spring1221

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" ^, m5 ^. ~1 p( s2 _2 V. R3 d' D! S! v0 z
想问一下楼主，原代长到18天的时候状态怎么样呢。胰酶消化是个经验问题，注意结合镜下观察就好了。我觉得主要问题在于，原代的换液时间，一般情况下，营养不足是细胞老化的直接原因，当然你原代密度太小会影响。老化是不能逆转的了，做个检测看看表达情况来确定能不能用吧

tonyww723

酶的问题不大，不过时间不宜过久，如果是组织的话 不要超过30分钟到1个小时，孵箱内，需要加血清终止反应。
- q& }# k  n  S' {  t不过看你的这个图，估计接种密度太低了，原代细胞如果量不大的话，最好放在培养皿养，标准的作法是看到克隆后，用tips挑出来，然后放在孔板里养，正常传代密度不要低于3000/CM2

liaoyanstudy

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- j2 C$ D4 T& W: w9 C
. y  E% `7 @0 y: j3 x/ p你好，目前干细胞遇到些问题想咨询你，这样的，由于实验室问题，更换了另外一个实验室人，然后新的培养箱CO2变化特别快，干细胞在传代之前，长得还算正常，但是我一传代，就不行了，老化特别严重，酶的问题我已经排除了，想问下C02对干细胞老化是不是有促进作用??谢谢~

liaoyanstudy

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6 D, P+ e& \2 ~+ e% m* I: q. B恩~好的~我再看看~谢谢~