关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

回复 三月桂花香 的帖子
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我猜测是酶浓度过高，消化时间太长，和培养瓶太大导致的~但是到了这个地步了，想问下，能有什么办法挽回吗？~' @5 S6 _3 E. l  F
谢谢~

gghywtfz

liaoyanstudy 发表于 2013-6-18 12:31
: p. k# o& Z& V! }0 v% R回复 三月桂花香 的帖子0 ?; H. }& S. y% a: ^) t( T
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我猜测是酶浓度过高，消化时间太长，和培养瓶太大导致的~但是到了这个地步了，想问 ...

$ Q# _  Y2 ~. ]# W- Z* M
老化了就不能再挽回啦。
: x5 z; }1 A0 v3 E9 y原代14天是极限了，长不满也得1：1的比例传代，养到18天细胞都不好了

yinfuhua

回复 yinfuhua 的帖子7 |( q: N9 B0 p+ u2 k& j- ]

- X0 g7 n7 D/ R, X# ^; }知道大概情况了。看照片，一部分细胞状态还好。还像是胰酶消化时间掌控问题（不要过长）。另外，培养时间也不要太长，细胞老化后，再消化也会出现这样的问题。

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子5 m" q; D, h) Z% g

" m$ d0 L+ A- ^6 d我先前也是养过白血病人的MSC，取材骨髓。培养后发现，一是：相对正常人骨髓来源MSC，其培养时间要长；二是：培养出的MSC形态多样，很多奇形怪状的，老化是另一方面（未有仔细观察，是否易老化？）；三是MSC扎堆的现象少，而正常人骨髓MSC有扎堆贴壁现象，不知是否其他培养过MSC的战友们有这样的感觉；四是：白血病人的骨髓分离出的单个核细胞数量通常量很大（初发或复发、非治疗中），因此我的实验中初始接种密度也大，其贴壁MSC相对数量也多，不知其相对比例是否也高（实验中初始密度不统一，也未做仔细比较）。$ ]1 b$ v; z# ~" g/ {  z+ c1 [) y
    有肿瘤方面的书或间充质干细胞专著中也可以找到些相关问题。图书馆很有用的，同网络比较，信息获取有其优势：方便，信息量大、全。
* Z: _3 D' R: O+ I    谢谢！

liaoyanstudy

回复 fengxiwu 的帖子9 u$ t2 ]+ J" `% C3 |

6 K' c2 \! i. H% N7 I7 f恩~好勒，方便留下联系方式么~向你请教，相互学习~！谢谢~

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子; V& g1 \" D" n' Q4 v
: T% p. w. e- B# R/ b; r
恩～，好的～我再试一试～但是想把这些拯救下，不知道有什么方法～

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子
# [( ]( x$ H# X- [7 [* `2 W/ j+ b; P3 R) i; M' w
正常消化下来，按照传代过程操作。根据细胞数量可以1传1或1传2就可以了。但培养时间不要超过5-6天，中间视细胞生长情况换一次液。你再看下细胞状态如何。

sdyinong

培养时接种所用的细胞浓度是多少，细胞长18天才铺满本身就是很慢的了，是不是接种的密度太少了？再就是培养基可以换成alpa-MEM培养基试一试

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子$ r6 s! m; n* M! M7 i" u  N# v

: E( F0 k# O. d" Q" t/ W: q我今天已经消化下来了，按照以往的老化经验，消化重贴后还是老化的那种状态~

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子/ c0 V3 h* N( }& c

; l* S% v3 V3 z间隔1-2天换液看下吧。