CIK培养中的细胞因子添加顺序问题！！！

lyj-0017

      传统培养方法都是D0添加IFN-r，D1添加IL-2和anti-CD3 mAb，这个工艺大家一般都是首先在培养瓶中培养，几天后转培养袋或继续使用培养瓶培养。0 F1 ]/ N. r( J$ ?6 h
    问题1：传统工艺为何必须要首先添加IFN-r，24小时之后添加后两种细胞因子？可不可以在D0天同时添加IFN-r、IL-2和anti-CD3 mAb呢？
4 K( c: {& B; y/ k& E& |8 o    问题2：是否可以分离出MNC后直接转入培养袋添加细胞因子进行培养呢？) f6 S2 p0 F5 \+ t8 X/ J1 E

* W' @7 j* M! m0 |1 ~    期待高手不吝赐教啊~
, U2 U1 c/ Q5 M) C7 J9 ~5 D  P: B

jianmin1979

很受用

lyj-0017

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& N( o3 o  t) A9 |/ P) H
/ f0 H! Z6 ~8 d1 \嗯，最近就按照这个密度试试，非常感谢啦~

jxydiandian

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& u. M5 H" ^0 v, e+ x2 K7 _
' m* ~( }' ?0 P4 K5 U2 |6 S" E( E( t, g转袋的密度跟瓶扩的密度是一样的，差不多还是按0.5-1*106/ml密度吧

lyj-0017

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& k  t, l+ B% R. Q. Z/ h4 }
/ M! I8 ^8 i* A不好意思哈，一开始没有深刻领悟你的话，现在明白了。那你认为转袋的细胞密度应为多少比较合适呢？

chslyx

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, [& N+ N( @: P0 t% U. d. k. s3 {8 J# w6 T% J) F
第零天加IFN-R是为了增加细胞毒性，前二十四小时主要是诱导细胞的毒性，加了IL-2的话会影响诱导的效果，，而问题二主要是因为细胞密度问题，因为刚分离出来的MNC会比较少，用培养瓶会增值比较快，因为细胞聚集的话更容易增殖

jxydiandian

回复 lyj-0017 的帖子- }) W# e' C; h( V

3 f' f( C9 l! n. A我觉得你应该把我的回答在看一遍

lyj-0017

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3 y  E2 K% V$ t6 F* t8 }0 _. |, D  Q* D
如果细胞数量够多呢？比如使用血液分离机分离单个核细胞，这样分离得到的单个核细胞相对较多，这种情况下是否可以三种因子一开始时就同时添加呢？

jxydiandian

补充：在诱导CIK细胞形成过程中加入IFN-γ可降低IL-2 用量,同时IFN-γ加入的顺序与细胞毒活性密切相关, 先加入IFN-γ后加入IL-2 可提高细胞毒活性, 这是因为先加入IFN-γ, 可促使PBMC上IL-2 受体数量增加,从而有效地激活效应细胞

jxydiandian

对于第2个问题，是否在培养袋直接培养要看细胞数量的，如果细胞数量太少，在培养袋培养，细胞密度太低，不易于增殖