如何计算细胞比例

lmh_yixue

一个培养皿中有A和B两种细胞，他们的形态不一样，如何计算两种细胞的比例？有哪些方法高效方便？8 h. Y* `6 \' X, ]
我现在显微镜拍照后计数两种细胞的数目得到的比例是否科学？是否可以用流式？还有其他更简单、科学的方法吗？
+ p* ]  |; w6 ?4 I* _; a3 e$ O谢谢大家！

jack1381818

計算細胞數目可用血球計數盤或是自動粒子計數器(Coulter counter)，可依實驗需要使用之。0 v9 o8 r% e0 n1 g" `
血球計數盤有二個chamber，每個chamber中細刻 9 個 1 mm2之大正方形， 其中位於4個角落之正方形再細刻16個小格，深度均為0.1 mm。4 {; y- v6 w; l* \) N) ^  t
當chamber上方蓋上蓋玻片後，每個大正方形之體積為1 mm2 x 0.1 mm = 1.0 x10-4 ml 。
; r8 H1 t. K( l9 Z% _# W; R6 z5 }0 @使用時，計數每個大正方形內之細胞數目，乘以稀釋倍數，再乘以104，即為每 ml 中之細胞數目。, }8 V3 o2 I. [5 h) r6 h9 C% \6 k
存活測試之步驟為dye exclusion，利用染料 (例如trypan blue) 會滲入死細胞中而呈色，而活細胞因細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。, i! F. c6 d4 t8 G$ s  X
為了確定不同類型細胞的數量，通常要製備血塗片，並分類和計數大量的細胞（一般至少計數100個白細胞）。這樣就可以得到每種類型細胞的百分數。這種百分數與白細胞總數相乘，即可得到相應類型細胞的絕對數。

usepray

单单形态不一样，表面MARKER不一样，用流式难度大：细胞消化下来形态就变化了，细胞大小如果不一样的话可以一试。个人认为最简单快捷的方法是拍照计数，这种方法有什么不科学的呢？选择区域随机即可。　

mania7041

如果能够较好的区分出那种是A细胞和另外一种B细胞，当然使用血球计数板在显微镜下计数是比较好的（前提是你的取样要准确）
' J' U/ \, C7 Q& t' X% Y如果不能区分只能借助其他设备了，比如血液分析仪、自动粒子计数仪等

changbo529

回复 lmh_yixue 的帖子$ J7 B, E* E6 B* H7 I! U
( L$ v0 C8 |$ X. p$ }( l3 L. ~
感觉单纯依靠细胞计数去定义两种细胞的比例效果不是太好，可以依据两种细胞各自所具有的特异性抗原而采取流式细胞分析，即可筛细胞各自的比例

lmh_yixue

谢谢大家

sun_happone

两种细胞的消化时间一样吗？如果不一样，可以通过消化可以大致将两种细胞分开，然后分别记两种细胞的总数，然后再计算每种细胞各自的比例。

lmh_yixue

回复 sun_happone 的帖子+ T  T, S: j. y  t  J2 Y1 G

% i' p/ M, ~% A2 p消化时间不一样，这个办法不错！