如何计算细胞比例

lmh_yixue

一个培养皿中有A和B两种细胞，他们的形态不一样，如何计算两种细胞的比例？有哪些方法高效方便？
2 E1 x" @& Z% ?+ w* p  z我现在显微镜拍照后计数两种细胞的数目得到的比例是否科学？是否可以用流式？还有其他更简单、科学的方法吗？
; A. K( c  ~1 J  t) z谢谢大家！

jack1381818

計算細胞數目可用血球計數盤或是自動粒子計數器(Coulter counter)，可依實驗需要使用之。- z* o5 R) r' |; l
血球計數盤有二個chamber，每個chamber中細刻 9 個 1 mm2之大正方形， 其中位於4個角落之正方形再細刻16個小格，深度均為0.1 mm。
$ U$ d; C* a/ s. N; e" G當chamber上方蓋上蓋玻片後，每個大正方形之體積為1 mm2 x 0.1 mm = 1.0 x10-4 ml 。
% j5 Y' {% h3 k9 b5 G6 l0 s& Z使用時，計數每個大正方形內之細胞數目，乘以稀釋倍數，再乘以104，即為每 ml 中之細胞數目。
1 N( y" U* y. ^存活測試之步驟為dye exclusion，利用染料 (例如trypan blue) 會滲入死細胞中而呈色，而活細胞因細胞膜完整，染料無法滲入而不會呈色。
) }6 ]0 R4 V: y7 m, N: b3 F為了確定不同類型細胞的數量，通常要製備血塗片，並分類和計數大量的細胞（一般至少計數100個白細胞）。這樣就可以得到每種類型細胞的百分數。這種百分數與白細胞總數相乘，即可得到相應類型細胞的絕對數。

usepray

单单形态不一样，表面MARKER不一样，用流式难度大：细胞消化下来形态就变化了，细胞大小如果不一样的话可以一试。个人认为最简单快捷的方法是拍照计数，这种方法有什么不科学的呢？选择区域随机即可。　

mania7041

如果能够较好的区分出那种是A细胞和另外一种B细胞，当然使用血球计数板在显微镜下计数是比较好的（前提是你的取样要准确）& m# y! h/ L" q9 m
如果不能区分只能借助其他设备了，比如血液分析仪、自动粒子计数仪等

changbo529

回复 lmh_yixue 的帖子; t, G3 F+ v0 c0 k! k% a: v+ m
+ t! k; a' \6 D; ^
感觉单纯依靠细胞计数去定义两种细胞的比例效果不是太好，可以依据两种细胞各自所具有的特异性抗原而采取流式细胞分析，即可筛细胞各自的比例

lmh_yixue

谢谢大家

sun_happone

两种细胞的消化时间一样吗？如果不一样，可以通过消化可以大致将两种细胞分开，然后分别记两种细胞的总数，然后再计算每种细胞各自的比例。

lmh_yixue

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4 K1 i- r+ G! |" u  f$ M: f/ m2 h' D; ^& B
消化时间不一样，这个办法不错！