质粒提取不纯

like_gj

最近做克隆，提取的质粒测序是正确的，反馈信息说信号不好0 Y6 ]& _1 T! q9 _8 W7 c
我自己跑电泳时发现总是有两个质粒条带（开环，共价闭合，线型算一个质粒）我需要的是8K
8 ^- l. V: X7 P; }大约在4K左右还有一条* M- H/ w6 A1 o- g! R
然后我用这些质粒重新做转化，挑单克隆，提质粒后发现还是有杂带3 t# t1 B3 F- f1 v0 t! J
请问如何清除这些砸质粒？
8 l, E; h8 o$ _( {) c) ]6 ^: [

chenhuachen

小弟现在做p53对转化细胞代谢的影响，急求TET四环素诱导的wt-p53质粒，对接下来的实验非常重要，跪求论坛里的园友谁有这个质粒，可否赠小弟一点，不胜感激！
# x) p9 Y/ y' R4 A人的或者大鼠的野生型p53都可以。

Dancmacabre

40ng/ul，这个质粒的OD值很低。建议你直接菌种划线，最好挑几个单克隆做下PCR检测，接阳性单克隆于试管在摇床培养。最好分析一下该质粒的基因序列，如果是你自己构建的克隆，你要弄明白它的功能区里面是否插入致死因子编码区，或者有其他增强型的表达蛋白，有可能会决定你的质粒拷贝数很低。至于有一个4K条带，那可能是断裂的DNA片段，你可以做一下PEG纯化，若效果不明显，只能做胶回收。

mckf111

like_gj 发表于 2013-7-15 15:26
2 B3 a7 }% u* x; z% x3 g7 {$ g另外，我用感受态直接摇菌培养8 Q% k( ?% L. d" d  n) h2 O
提取的质粒大约40ng/ul (共70ul)，请问这个感受态是不是有问题？

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感受态应该是空菌 不含质粒 应该考虑重新购买了

like_gj

另外，我用感受态直接摇菌培养* V) e. ^$ L) ~1 E
提取的质粒大约40ng/ul (共70ul)，请问这个感受态是不是有问题？