精原干细胞建系后marker验证

20111109

0 w, q# _* A7 [- E3 Z
: l4 J, ~& j' K1 J3 z) M
: ^+ I* k; V2 `' d
如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等
" h. n' [, t* s& |我想问的是: v. C  V: J6 D. u3 X2 U8 _
1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）# Q, P2 n5 R6 |! Y
2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）( w# e; c+ X- i# T) S' B% O; E
3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。
+ |7 b% Y' |8 s" Y# O" n/ s4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。6 c( V( i$ t! o/ E
刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~% E9 s8 F8 @  `
( m. Q3 R/ F/ p: e! q6 \

+ A8 `9 ^, y( ?$ [6 p2 m% \

jialiyang

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! w4 `+ P% a& T9 Q  \5 u' X9 R1 A8 c- E( w% p- S! c" S6 h
1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白  Z; H+ i- {/ |% Y7 I$ N" f, a) X
4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

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+ A( V9 O+ L- _" J8 M- w& I& s( d. U
你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

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$ N( f  m& v+ p% L. v. r
- r" T( W* m1 |9 Q抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

回复 bj123 的帖子5 Q: r. M6 }5 R3 s# d( G  j- f& u
, \' e: a5 n* V$ G0 ]: s: R
嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

$ |- X7 a9 Q" O6 @/ y, S7 @( G" R/ o, E

20111109

回复 moluxingke 的帖子6 b. u6 N) x& p' `. V

; L+ p0 r9 C; F7 K% F/ N抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。$ f: m( H& a1 o  T% z, D
其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。
! M$ {7 l1 ?7 a% I8 o$ V5 N  v再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

回复 zhangyan813 的帖子' Q  u/ B( \  Z

) X6 _. _1 u/ j6 f. Y9 Y9 @- Q感谢您的答复~~; d' w  D4 u( ~5 Q; D; E, m! a
我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。
7 }; C. e2 _, o0 b% o您的建议很对，核定位要做个triton打孔。
) u; k! r* P+ _: ?& D& \: [但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。