精原干细胞建系后marker验证

20111109

* K4 T3 A( T; ^8 t

! y9 ^" d' F4 R  q2 B2 w  l0 o; Y: A+ w: r, e( t
如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等( S- q) {& x4 Z+ i* m0 Q
我想问的是
$ d% g% [( Y/ I. v$ G' q9 T# ^1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）6 |) Q. h7 @! Q' {4 f8 \0 d; C0 ]- Y
2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）- i1 ^" t! q) M' d9 q6 g
3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。8 v: _; q: R8 j
4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。* W8 H- z! a5 s* V
刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~" q0 l9 C/ `/ ~9 Z$ X

: O& Z. F" O6 a7 D+ B! [
' e7 Z+ o% D5 u# u4 `

jialiyang

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! Y+ b$ R2 F0 a0 H! I( U
; o9 d( g8 E( D* X1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白- U% f( T$ [& G. T4 _
4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

回复 20111109 的帖子' F0 T9 X; [9 }' r

+ P0 S8 J# b. D; V2 p3 ~你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

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, x" S6 k- A& J% f2 e: v$ F# K( [- Z6 R' y( i
抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

回复 bj123 的帖子8 V0 k* E5 Z. H$ w6 C  m* ]

" ^6 Y" y$ |6 d6 X/ G( e' d8 N嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

- g6 \: [/ @- `* `2 x' v

20111109

回复 moluxingke 的帖子$ c! P% }- K( P7 V0 v

5 _) d" Q2 [+ k) V, q' n9 K1 `抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。- h" t9 L( g! F6 @$ A8 E
其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。2 L/ l0 K4 }4 o
再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

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9 C3 y+ V- [% n7 m5 u
5 o" K. v9 k* Z感谢您的答复~~
2 b. |1 g! b# S5 T. |# r- q我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。
3 |1 w# a0 C4 Z! e- T1 c- v# K" Y您的建议很对，核定位要做个triton打孔。/ o& i2 s" O2 o8 e
但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。