精原干细胞建系后marker验证

20111109

4 H/ O7 h7 k/ ]: G! O
- K$ \  d: ~5 M- `' F, p0 X2 r9 l
9 G6 Z; x: i7 g3 X* `如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等
# I) x' o6 V- P  L我想问的是
! Q( I- x$ U+ j7 w# n) {5 D1 F1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）
/ u; e. f: N( c2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）
& E' r8 p6 g# y3 v' i6 ?3 n3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。
# d# c$ u; e0 C. c1 _* e" B7 F4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。  C4 z- U8 s- K) ], }9 B
刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~- Q7 I% c  s& F( h" r
7 Y4 K, h4 K1 y: O7 z
! o. V( Y$ k5 z7 T4 I

jialiyang

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3 B- U) e8 U1 R, i! }7 Z. y3 e+ _4 K; Q+ B% q+ J- l6 K
1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白% |# L4 J+ M" I& m
4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

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9 _8 y7 u+ H  N3 a* }
4 R! ?0 E/ J; n' g4 Z1 Z" y7 w3 m你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

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5 m- o$ U& ^, Z1 E9 n. @
" u2 W, i! s' V& y抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

回复 bj123 的帖子7 }) {1 z' |# [2 m/ L: z+ J
2 c2 H+ _, Z! H$ n
嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

! C2 I( y8 h' [9 \: a4 q) J

20111109

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0 {8 ^5 w0 b/ P: `# X( s3 @0 w5 V7 ^) O+ u: U, ?3 \2 \, e' S
抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。
& f/ A7 H$ R7 s其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。
% d1 g9 `0 A- u1 l. e( }9 }; A再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

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* D1 d6 S; A; w* y9 Y% r& R+ K7 B) P+ s4 C* p6 ~3 }4 ^
感谢您的答复~~6 e: [8 v$ g% M+ b) {
我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。
& r; C1 r3 }. i' n+ [/ a您的建议很对，核定位要做个triton打孔。
( C2 ~* U" O1 N' Y1 x0 g) A但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。