精原干细胞建系后marker验证

20111109

. h( J1 p; O, p& E9 c' }
9 `8 L. ?* a8 g  O# {; M8 i( ]; `. y. x' ~6 m& c6 z, u0 [
如上图显示的，我验证了PLAF  OCT4 stra8 C-kit SSEA1等
6 x: g5 s% P3 z, X# Q1 o" @& S. b我想问的是
5 H: d2 p9 ^. r- G, a1、理论上，这些marker分别应该定位在哪里（核或质）
; d' J& N8 R- q* S& ]6 k" Y, ]" x2、这些marker分别在什么情况下表达（即哪些是未分化SSC表达的，哪些是分化SSC表达的）
3 a2 @, [" t; S) _3、有没有关于SSEA1的文献，比较新的，我对SSEA1了解很少。/ ?) |7 B) [- Z8 _! e3 l: i/ |! Q3 ~
4、C-kit 的抗体哪个公司的比较好？有没有人做过的。
# [) F2 E. _1 d. q/ Z1 h刚接的课题，刚建的细胞系，各种懵懂，先谢过各位了~~
1 M9 K6 R7 l: r0 C7 j% z; d2 ^- r( c. ]. A3 ~& ]
! q0 E; T! {- m3 o

jialiyang

回复 20111109 的帖子! j" P9 K9 H8 ^2 b, W: O+ R# a+ a
1 N3 N. T6 v% m
1、对于你所选用的marker所在的部位你可以把你选用marker的说明说下载下来，里面会说明是膜蛋白还是核蛋白% A5 g: X4 t- r( M! i" K
4、C-kit 也称CD117，我们实验室用的是Dako ,CODE A4502

bj123

回复 20111109 的帖子
+ Z$ [5 G6 g. M; E$ a2 @1 R% q2 K# Z2 I/ w1 _+ u$ h
你染得ssea-1好奇怪啊。应该是一个膜表达的marker。

20111109

回复 jialiyang 的帖子- k+ l" G, L% c4 J9 K1 r; }
7 Y0 q  k6 Z' U3 Z
抗体说明书里面做的荧光许多都是在非干细胞里面做的，不知道有没有参考价值。。。

20111109

回复 bj123 的帖子
: Y" w' _) g' |; {3 P" W3 X
  G, G* K/ L/ r  l嗯 C-KIT也是一个膜表达的蛋白，我做的这个结果是在核的。所以我觉得也许是因为C-kit 和SSEA1的抗体不行，而且本来我做的这个验证预期结果也是C-kit和SSEA1不表达的

moluxingke

照片不能再照的大一点了吗？那样是核定位还是胞质或是膜定位也好看一些呀。

20111109

( N" {3 N+ L  c; a1 |

20111109

回复 moluxingke 的帖子# k2 m" Q) ~- I# Z% C) E+ O( n
& s4 }+ J8 n) ~6 p7 R) o! \
抱歉 我把40X的图原图放上了~~

zhangyan813

首先我想问一下，你做的是什么物种的SSCs，大鼠、小鼠还是大动物？不同的物种现在已经有研究的很清楚的特异标记基因，建议用特异的基因做鉴定。
; |" U9 }2 X) x" }4 T' }3 t" \其次，你的SSCs，通过形成clony的样子感觉还是蛮好的，长得很好。但是我建议你做染色的时候，不要做这么大细胞浓度的，这样的话，一大团是看不清楚，到底是在膜上还是在细胞核里。打算做染色的wells，最好是接种的时候少一些细胞进去，或者是生长了两三天的时候就固定来做，细胞浓度低一些，会好很多。
; I* e- b1 @( a+ Z再次，PLZF, OCT4都是核定为的，这些都是要做通透才能够得到很好地结果的，你不知道在哪里定位，不知道染色是怎么做的，没有通透得到的结构是否可信？另外，c-kit建议你最好不要用来做鉴定，这个基因被认为是分化的标志，但是在SSC里也还是有表达的。

20111109

回复 zhangyan813 的帖子' @' V1 H. J  [3 S) q% s
  P3 x! s9 Q( i; f" @4 S3 h
感谢您的答复~~
! K: N* L, _" ]' R6 c我做的是小鼠的SSCs，因为我是第一次建系，第一次做milicell，所以什么都不知道的情况下就做了，(⊙o⊙)…实验还是应该了解全面再做的。
6 @( X. A" R' S) k您的建议很对，核定位要做个triton打孔。- J$ y* i! ?! D2 p7 D8 n
但是，之所以染C-kit就是想判断培养的SSCs是否发生了分化。。。文献里说未分化的SSCs是不表达C-kit的，因此做了。