精原干细胞建系后marker验证

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先回答下你的问题：4 V2 H" P( W8 I3 O" g
1.PLZF、OCT4都是核定位，stra8编码的是视黄酸受体，胞膜胞质都有；KIT、SSEA1是膜蛋白。0 e, c6 F' t5 r1 O3 n6 l4 @
2.从我所知的。小鼠的PLZF在AsAprAal中均有表达，有文章说OCT4和PLZF一直是共表达的。也有的报道OCT4是As和部分Apr，另外，OCT4的表达应该是比较弱的，那OCT4来做IF估计不能得到很漂亮的图，我看你上面的图也是曝光爆得很长。STRA8和SSEA1是生殖系细胞的marker。KIT从A1开始表达。另外，SSEA1是根据一个单克隆抗体找到的抗原。我至今不知道是什么基因编码的，看文献，也觉得是比较久远的文献才会用SSEA1来染SSC。
7 a; W( Q$ K/ T' ^& X3.SSEA1全称stage-specific mouse embryonic antigen 1，对这个抗原我也比较困惑，所以一直避而不见。
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% r* }( n, t2 P2 M我还想请教几个问题，你这些细胞是在培养皿底做的还是？我自己也在染SSC，但是SSC有一个特性就是贴壁特别不牢，尤其是克隆长到像你的这么大的时候，做个IF之后就都不见了只剩下些小克隆。我想问问你是怎么解决的？还有就是，你的PLZF是没有透化过？方便把抗体信息透露一下吗？我的PLZF染得都不是很强。
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7 v7 ~. b1 K% z还有个建议，建议不要染KIT，因为IF这东西，阴性阳性本来就很模糊，需要对照。当然你可以去找3周大的小鼠睾丸消化成单细胞之后做阳性，但是太麻烦。而且，PLZF是转录抑制因子，它就结合在KIT上游的调控序列上。
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回复 20111109 的帖子$ M9 S% r) e9 p8 B, j

( Y$ S/ a- G0 M我也是用mef养，你是brinster的体系吗？

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回复 20111109 的帖子
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好的，谢谢了，我也觉得shinohara会比brinster的高级一些，青出于蓝胜于蓝嘛

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回复 gemstone 的帖子; `! M7 _2 @9 y# ~$ g4 E8 r( s# @* J
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我刚分离出来的thy+都没有OCT4。。。