CIK细胞洗涤离心上清液中所含小颗粒！？

jianmin1979

CIK细胞培养液离心收集后一般用生理盐水洗涤并离心几次，我们最近开始对离心上清试着进行革兰氏染色检查，发现有部分碎裂的细胞，也有很多大小不一颗粒状物质，这些颗粒有的呈圆形，或者不规则大小，有的跟细菌大小很像，作为新手，虽然觉得应该是细胞碎片或溶出的些东西，但还是不放心，不知道这些应该怎么判定。是不是需要用其他检测方式来进一步确定。

woosheng

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应该是血小板。
1 I: F! i  }$ q; P" q+ a
0 B( {4 l- ?- G" M  }/ W1 Z! R+ I顺便问一句，你们用什么培养基？效果怎么样？

chenguangyu

转速太高、离心次数太多或时间太久都会导致细胞的物理损伤，部分细胞破碎。

xiakexing

我想应该是细胞碎片，如果你培养的cik正常的话，也就是细胞不是因为污染导致的，那么很有可能是操作原因导致的细胞破碎，1 k) I) i3 E, g8 A4 u. @1 ^
或者是你提取分离cik时夹杂有其他细胞，是其他细胞破碎形成的细胞碎片。

jianmin1979

多谢楼上的答复，我在这里还补充一下，我们在给CIK做血培养时，在双相培养瓶里会发现少量絮状悬浮物，摇一摇会消失，放置一段时间又会出现，我们再对培养瓶里液体抽样做革兰氏染色时，会发现极少量细胞，也有很多大小不等的各种颗粒状物质，但普遍都比较小，跟细菌大小差不多，但应该不是细菌吧。

sunny.yc

回复 jianmin1979 的帖子% z" G" T# X' e

1 n( {7 c4 W  }+ X* E如果你怀疑是细菌，那你应该用培养细菌的手段去培养一下，看看是不是细菌，革兰氏染色是不够的

jianmin1979

回复 sunny.yc 的帖子' y2 v$ g8 L( |: m3 m4 Q
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血培养中厌氧瓶没出现任何问题，就是双相培养基中会出现我所说的那种少量可以摇散的絮状，取絮状的双相培养液染经革兰氏染色在1000倍油镜下观察到的颗粒，应该不是细菌而是碎片或其他溶出物吧，我想如果是细菌，双相培养基上是不是应该看得很明显吧，请问还有什么其他方法可以进一步确定无菌，因为作为新手，实在是比较担心这种情况，害怕自己的判断失误而出现问题。

呼吸

应该是 细胞碎片，形成这种原因应该和你的离心力，离心时间，洗涤次数有关系。

sunny.yc

回复 jianmin1979 的帖子2 J- H. O% U8 ?) h

% F, ?/ h2 s6 C" {2 p+ H你担心有可能是多余的，淋巴细胞分离液的好坏、是否添加自体血浆或吹打细胞造成细胞碎片都有可会在显微镜下看到一些乱七八糟的无法解释的东西
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) n7 @: V: k) D# Q' o所以，我建议，别太钻这个地方的牛角尖，实验继续做着，只要保证严格按照无菌操作要求，流程先走着，如果出问题，也会在后期表现出来

jianmin1979

回复 sunny.yc 的帖子: I1 n+ C7 {, {( E/ l+ j: r+ p

6 N& \' w  ]1 k+ o你的回答让我觉得安心很多，我主要是担心别人质疑我们的检测，而我们一时又无法做出准确的判断和说明！