谁有悬浮细胞球培养经验

Leipzig

悬浮细胞一般怎么换液，离心多少比较好，传代是要吹打很多次把细胞球打碎吗？多谢

lily132

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你好fengjh100,$ }: N# @0 w2 F2 w( K9 v
请问你是如何消化细胞球的呢？用什么消化酶，多长时间？你做过U251细胞没呢？

fengjh100

不好意思，近期由于实验繁忙，没有及时到这里回复，见谅！& e! U  `6 x; ~4 T; f) z  F1 o2 B
出现贴壁的情况还是比较常见的，一般是饲养环境所致，部分是饲养时间过久，细胞老化所致。解决办法有：1是用3D培养，其实可以简略些，用琼脂糖铺底板，这个经验坛子里说明的已经很多很常见了；2是加入一些抑制分化的因子，如白血病抑制因子等。传代的判断不好界定，靠经验吧，摇动后发现絮状沉淀比较多的情况下，需要及时传代了。建议细胞成熟后及时使用，尽量不要传代，因为可能出现变异。且状态不良。每天都尽量摇动悬浮的细胞，可以避免出现不均的情况，也可促进其球体形成。- b, Y& Z7 V3 c- b8 n

Leipzig

回复 fengjh100 的帖子4 u% N  y* u' f

  s5 A  l# v8 c  L9 U非常感谢，我以前没养过悬浮细胞，刚开始，发现很多问题，上次本来长的很好，我换了次营养液，只换一半，后来发现一些碎的死细胞，不知道是球太大老化了，还是不适应新溶液，还是我操作过猛。
: l9 |( n2 f6 x  U! D8 q  |3 f有的细胞球很大，有的很小，很难判断是否要传代，以大球为准吗？
; c6 y# X7 B& v* [4 b9 v! O有时细胞会自己聚集在一个区域内，很密集，其他地方几乎没有细胞，这样是常见现象吗？9 S* r7 G- ]! Y- K) Q
如果部分细胞出现贴壁应该怎么办呢？

Leipzig

回复 fengjh100 的帖子* p1 G/ G+ L/ K5 B: e

' x* x8 s# p0 f' O) S非常感谢，我以前没养过悬浮细胞，刚开始，发现很多问题，上次本来长的很好，我换了次营养液，只换一半，后来发现一些碎的死细胞，不知道是球太大老化了，还是不适应新溶液，还是我操作过猛。
: T5 @1 ~! H8 `( C有的细胞球很大，有的很小，很难判断是否要传代，以大球为准吗？
: w. N+ F/ P, O! W3 B1 i7 G有时细胞会自己聚集在一个区域内，很密集，其他地方几乎没有细胞，这样是常见现象吗？
1 ~% u1 K9 x; U. o3 ~; C如果部分细胞出现贴壁应该怎么办呢？

fengjh100

因为是悬浮细胞，不能凭空评定多少细胞数量，看密度只能靠经验和感觉，比如加了有6-8ml的培养液了，里面细胞球团也分布不少了（要根据细胞分布的空间密度），差不多每个高倍视野有10个以上的球团了。那么就可以传代培养了。当然如有自动计数器就更方便了，虽然麻烦些，但计数更精确些，一瓶细胞假如是T15的，个人感觉200-300万即可传代。大瓶的迭加数量吧。希望我的经验能帮到你。

Leipzig

fengjh100 发表于 2013-8-3 12:29
4 A4 r  I; v% X' o甭客气，都是同道中人，望多交流。

/ q5 m) C0 ]% R5 `6 a- i
真是个好心人，我还有个问题，悬浮细胞长到多少密度或者大小就要传代呢？先谢谢了！

fengjh100

甭客气，都是同道中人，望多交流。

Leipzig

fengjh100 发表于 2013-8-1 11:00
$ S/ Z- l: P1 s7 G; `! m悬浮细胞球大多培养的是干细胞，不同的干细胞处理方式有所区别，假如是肿瘤干细胞（CSCs），那么采用血清剥 ...

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太谢谢你了，对我很有帮助

fengjh100

悬浮细胞球大多培养的是干细胞，不同的干细胞处理方式有所区别，假如是肿瘤干细胞（CSCs），那么采用血清剥夺法培养时在成球前一般需要换1-2次液体，3-4d换一次；此后，在球体初步形成时，就不要换液了，加液即可，加液到一定程度，感觉培养基中背景较深或细胞需要传代时，就需要离心，一般采用纯化、离心、消化、吹打等步骤，离心可以采用500转/3min。记住，消化细胞球体要重视，不然细胞状态不好。另外，吹打30-50次之间合适。不知我回答是否满意。如培养神经元干细胞，心肌干细胞等，那么处理方式又有不同。
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