谁有悬浮细胞球培养经验

Leipzig

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非常感谢，我以前没养过悬浮细胞，刚开始，发现很多问题，上次本来长的很好，我换了次营养液，只换一半，后来发现一些碎的死细胞，不知道是球太大老化了，还是不适应新溶液，还是我操作过猛。
' v) D7 p  r1 j. c. D+ h有的细胞球很大，有的很小，很难判断是否要传代，以大球为准吗？) B! t# h+ F0 h9 s+ J
有时细胞会自己聚集在一个区域内，很密集，其他地方几乎没有细胞，这样是常见现象吗？( O) Z. S& Y  ]  M2 \1 _+ c; o) Y
如果部分细胞出现贴壁应该怎么办呢？

Leipzig

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, d* ]) `7 l7 ^非常感谢，我以前没养过悬浮细胞，刚开始，发现很多问题，上次本来长的很好，我换了次营养液，只换一半，后来发现一些碎的死细胞，不知道是球太大老化了，还是不适应新溶液，还是我操作过猛。' e5 j$ ?# v; f6 D. ^
有的细胞球很大，有的很小，很难判断是否要传代，以大球为准吗？$ d5 M  \4 I6 I+ ]' m8 X7 u
有时细胞会自己聚集在一个区域内，很密集，其他地方几乎没有细胞，这样是常见现象吗？
: p# I2 i3 m3 {$ @, _5 S3 u如果部分细胞出现贴壁应该怎么办呢？

fengjh100

不好意思，近期由于实验繁忙，没有及时到这里回复，见谅！' O% |3 q2 m) ~# P- {
出现贴壁的情况还是比较常见的，一般是饲养环境所致，部分是饲养时间过久，细胞老化所致。解决办法有：1是用3D培养，其实可以简略些，用琼脂糖铺底板，这个经验坛子里说明的已经很多很常见了；2是加入一些抑制分化的因子，如白血病抑制因子等。传代的判断不好界定，靠经验吧，摇动后发现絮状沉淀比较多的情况下，需要及时传代了。建议细胞成熟后及时使用，尽量不要传代，因为可能出现变异。且状态不良。每天都尽量摇动悬浮的细胞，可以避免出现不均的情况，也可促进其球体形成。
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lily132

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请问你是如何消化细胞球的呢？用什么消化酶，多长时间？你做过U251细胞没呢？