hES传代的问题（维持培养）

郁金凤

hES传代时大家都把ES克隆分成多大的细胞团进行传代啊？分成多大的细胞团进行传代时可以减少ES的分化，ES还长得比较好？

linlicau

郁金凤 发表于 2013-8-24 10:44
( Y" C  P# i' `* M0 U. _hES传代时大家都把ES克隆分成多大的细胞团进行传代啊？分成多大的细胞团进行传代时可以减少ES的分化，ES还长 ...

" B; J( Q( X7 ~$ x一般情况下我用刮的方法传代~ 用挑的方法也可以，一般把一个hESC克隆分割成4份。
% v; F$ c4 W. ?4 n* n. q  ]9 R& e  X1 g% ~2 l: c' U& D$ m
其实分化与否与ESC的大小关系不大，只要MEF好，无论怎么样都不会分化。

amywang

用 dispase 消化，刮传，几乎不会分化啊

郁金凤

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2 I: I! V: H$ A1 k9 B' R  b% L% N: f
& r; Y, C) a" I6 E恩  thank you！ 我们实验室都用挑的方法， 就是有时候ES克隆分割的太小了 不容易贴上容易死  克隆分割的太大了 ES又容易老 刚开始做实验没经验 这个度很难把握  * }% c3 I4 B' ?  |% Z7 Z) j. m0 Q9 W

郁金凤

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4 l! J. r# N! X3 Z1 A* z% y
: j& ?* H0 ~! {" n您能不能具体给我说说呀？thank you！

星光灿烂

用 dispase 消化，轻轻吹下来，不高于800转离心后，吹打几次，团块不要吹的太小，如果总吹成接近单细胞的状态，养时间长了就不行了。我传一般不用刮的。

郁金凤

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恩 好  那我再试试  你吹成的团块大约都多少个细胞大小啊？

星光灿烂

这个具体没数过，团块大的话获得的克隆就少，长的还快容易老，我一般吹的比较小，但是肉眼要看到团块的样子

郁金凤

回复 星光灿烂 的帖子( n5 R) a8 M/ i" u- J/ R
' U" B. w; I  C4 y6 f5 O" \
恩  好 那我在摸索摸索  谢谢你啊！

Jonathan

买点accutase，直接消化成单细胞，然后1开6或者1开8的比例进行种植。非常方便