蛋白表达量低 WB检测怎么优化

懵懂干细胞

1、如题，最近在检测一种蛋白，在细胞中表达量不高老是检测不出来，开始以为是抗体的问题，后面做了个高表达的细胞，结果发现结果很漂亮，可是我要用的细胞该蛋白表达量很低，有那些措施可以提高蛋白样品中的目的蛋白的含量啊？低表达的目的蛋白WB检测大家有哪些优化措施啊？还望大侠们不吝赐教啊！谢谢了

moonison

如果必须要用WB的话，最好的做法是先用抗体纯化一下，IP，然后再抗一般来说就会好很多的。当然样品尽可能上的多一些，比如用大一点的胶，这些都是细节了。

sun_happone

一定要用WB检测吗，如果只要达到检测蛋白这个目的的话，建议可以试试ELISA，其灵敏度比WB高，而且现在的ELISA试剂盒都是比较成熟的。

yehaizi

回复 懵懂干细胞 的帖子# }" D. e3 _; C" n6 }$ `

1 z) }, R$ }# _  j( d现在也有用流式技术检测胞内蛋白的,定量应该比较准确,不过我还没做过

cronos0910

quantum dot labeled antibodies， I've used that to detect the protein concentration as few as 10 pico-gram.

moluxingke

个人的建议，仅供参考哈：1 增加细胞数量，多收集一些细胞，增加蛋白量；2 用IP或是其他的方法富集纯化一下蛋白；3 跑WB的时候，上样多一些； 4 一抗浓度适当增加一点；5 曝光时采用超敏型ECL。  另外问一下，用细胞免疫荧光检测不知道可行不？

懵懂干细胞

回复 neuralstem 的帖子
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懵懂干细胞

回复 mzaq2006 的帖子8 `, M+ \  f4 p. W- N) }# o
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胞浆蛋白  

neuralstem

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mzaq2006

那就是非得用WB检测吗？