蛋白表达量低 WB检测怎么优化

懵懂干细胞

1、如题，最近在检测一种蛋白，在细胞中表达量不高老是检测不出来，开始以为是抗体的问题，后面做了个高表达的细胞，结果发现结果很漂亮，可是我要用的细胞该蛋白表达量很低，有那些措施可以提高蛋白样品中的目的蛋白的含量啊？低表达的目的蛋白WB检测大家有哪些优化措施啊？还望大侠们不吝赐教啊！谢谢了

wateryong

我最近也有这个问题...
4 Z0 \% I/ P6 f' j0 k# a我想到的是加大蛋白浓度提高抗体浓度.; P, _0 V! x4 c4 L
还有转膜条件尽量摸索的好一些,尽量让目的蛋白大小的蛋白转膜的效率最高.

mzaq2006

那就是非得用WB检测吗？

neuralstem

ELISA,0 V) \8 J1 n1 U- s4 C; |
IP

懵懂干细胞

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' N% C2 X* R3 M, Z5 b" e" q5 C0 R7 t7 w- L
胞浆蛋白  

懵懂干细胞

回复 neuralstem 的帖子5 A2 e$ Z! V* Q. ]! g# ?

, X9 c* |5 {0 N$ Y胞浆蛋白

moluxingke

个人的建议，仅供参考哈：1 增加细胞数量，多收集一些细胞，增加蛋白量；2 用IP或是其他的方法富集纯化一下蛋白；3 跑WB的时候，上样多一些； 4 一抗浓度适当增加一点；5 曝光时采用超敏型ECL。  另外问一下，用细胞免疫荧光检测不知道可行不？

cronos0910

quantum dot labeled antibodies， I've used that to detect the protein concentration as few as 10 pico-gram.

yehaizi

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+ m7 G6 v+ j8 f# S+ j4 b- Z- V) H8 }
现在也有用流式技术检测胞内蛋白的,定量应该比较准确,不过我还没做过

sun_happone

一定要用WB检测吗，如果只要达到检测蛋白这个目的的话，建议可以试试ELISA，其灵敏度比WB高，而且现在的ELISA试剂盒都是比较成熟的。