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ningtinglu

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楼主

发表于 2013-9-13 15:09 |显示全部帖子 |倒序浏览 |打印

设计引物时在引物的5‘端加了酶切位点保护碱基，酶切过夜都切不开，后来只好连的T载。但是一直困惑为什么切不开，大家帮忙分析一下原因，有什么办法吗？谢谢

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沙发

发表于 2013-9-13 16:27 |显示全部帖子

回复 yaolinzhang 的帖子7 r$ o3 N' W2 j/ E# m

两种酶都是NEB的，在NEB官网上找的buffer，连了T载后相同体系可以切开。1和2应该都不是原因，保护碱基是在网上找的不知道会不会影响

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ningtinglu

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藤椅

发表于 2013-9-16 17:43 |显示全部帖子

回复 yaolinzhang 的帖子

不还意思，这两天有事没来的急回复。酶和buffer都是NEB的，体系是10ul的：酶各0.5ul，1ugDNA,1ul的buffer，水补齐到10ul

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ningtinglu

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板凳

发表于 2013-9-16 17:44 |显示全部帖子

回复 chips100 的帖子5 Z! E) _$ L! r
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这个都是按网上的加的，应该没问题吧

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